动物源性食品中各种动物源性肉及肉制品鉴别检验的研究

被引量 : 24次 | 上传用户:djnm080910
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
近年来,动物源性食品掺假、过分添加各种添加剂、使用非食用性原料和成分等各种食品安全问题不断出现。因此,建立快速、准确的检测方法,对食品进行动物源性成分鉴定已经成为一个备受关注的问题。本试验开展了多重PCR技术鉴别检测肉食品中动物源性成分的研究,通过分子生物学手段,研究各类动物源性肉及肉制品的特异性基因,借助聚合酶链式反应的特性,来达到对相应的动物源性肉及肉制品定性和定量检测的目的。用KI法、氯仿-醋酸钠法、酚仿抽提法、试剂盒法和FTA滤膜法5种提取方法分别对新鲜动物组织进行基因组DNA提取,通过1%琼脂糖凝胶电泳检测,所获基因组DNA均呈现亮带,背景清晰,电泳条带整齐均匀,完整性好。用同等样品,KI法和氯仿-NaAc法提取效果最好,试剂盒法次之。紫外分光光度计所测OD260nm/OD280nm值在1.701.93,浓度为0.12.0μg/μL,提取的DNA无RNA和蛋白质或酚的污染。试验过程中通过对Taq DNA聚合酶、dNTPs浓度、Mg2+浓度、引物、循环参数、反应温度、反应时间等参数的优化,确定了PCR的反应体系和反应程序。鸭和猪(引物1)单重PCR反应体系为:预混液25μL,引物终浓度为0.2μmol/L,模板0.5μg,用ddH2O补足体系50μL。鸭成分PCR反应条件为:94℃预变性5 min;94℃变性30 s,56℃退火40 s,72℃延伸60 s,35个循环;最后于72℃延伸5 min。猪成分PCR反应条件为:94℃预变性1 min;94℃变性60 s,54℃退火30 s,72℃延伸30 s,35个循环;72℃延伸5 min。鸭肉DNA扩增后在226 bp位置有明亮条带,猪肉DNA扩增后在149 bp位置有明显亮带,与预期目的条带大小一致,空白对照无条带产生,无非特异条带。KI法最低检出限为0.005%,氯仿-NaAc法检出限为0.01%,试剂盒法检出限为0.1%.鸭和猪(引物1)双重PCR反应体系为:预混液25μL,鸭引物各2μL,猪1引物各0.5μL(引物浓度为20μmol/L),鸭模板1μg,猪模板0.5μg,用ddH2O补足体系50μL。反应条件为:94℃预变性5 min;94℃变性30 s,56℃退火40 s,72℃延伸60 s,35个循环;72℃延伸7 min。结果可同时扩增出两个清晰条带,位置与目的条带一致。用牛、山羊、绵羊、猪、鸡、马、鹿、兔8种动物相应的特异性引物进行多重PCR扩增,从不同物种扩增得到片段大小各不相同的PCR产物。PCR反应体系为:预混液25μL,混合引物6.5μL,模板0.5μg,用ddH2O补足体系至50μL。反应程序为:94℃预变性4 min;94℃变性30 s,58℃左右退火30 s,72℃延伸30 s,35个循环;72℃延伸4 min。经过反复试验,当引物的混合比例为通用上游:牛:山羊:绵羊:猪2:鸡:马:鹿:兔=1:2:3:0.5:1:0.6:2:1.5:1.8(1代表20 pmol/50μL)时,扩增效果最为理想。此方法能同时扩增出8种动物的特异性条带,检测灵敏度达到0.01%.实际样品的检测结果表明,自行混合的引物完全能够扩增出不同种类肉品相应的特异DNA片段,可应用于熟肉制品进行真伪鉴别及掺假成分的判断。本试验建立的方法特异性强、灵敏度高、快速和操作简便,为快速检测食品中动物源性成分构建了一个技术平台,能作为一种推荐性方法被质检部门推广应用。
其他文献
食品质量安全是目前人们最为关心的问题。随着中国经济的增长,国民收入的增加,人民生活质量的不断提高,乳制品已成为百姓不可或缺的食品之一。其质量的好坏不仅影响生产企业
彩票行业作为体育产业的重要组成部分,是个快速发展的行业,也是全球公认的朝阳产业。即开型彩票作为一种快速消费品,其营销模式与其他商品有一定的共性。但是,作为一种有价证券,它
单核细胞增生性李斯特氏菌(Listeria moncytogenes,以下简称为单增李斯特菌)是一种重要的食源性病原菌,主要会引起成人败血症和新生儿脑膜炎等疾病,死亡率可达30%。该菌广泛
原料肉在屠宰和加工过程中汁液流失现象严重,使肉品生产企业蒙受极大的经济损失。我国肉类工业正处蓬勃发展时期,研究影响肉品保水性的因素,探讨解决汁液损失的途径具有重要
汽车排放造成的大气污染和地球的温室效应,已成为世界全人类的公害。这就使人类社会和汽车产业的可持续发展受到极大的威胁。发展汽车新能源、开发汽车新动力,成为世界汽车工
采用高转速杯式离心力雾化的自动静电涂装机(文内简称ESTA),配上机械手喷涂,可实现中涂、面漆喷漆室内无人全自动化。介绍了车身用ESTA设备工艺平面布置及其涂装线的工艺管理参数
何景明是明代中叶的重要作家,以他与李梦阳为首发起的“前七子”文学复古运动,提倡兴复古学,并以此反对靡弱的台阁体与重性理的性气诗,天下响应,有明一代文体为之丕变。李淑毅点校
介绍了聚乙烯丙纶复合防水卷材的产品结构特点和性能特点、防水系统结构特点和配套材料、应用拼接技术以及产品应用范围.
本文对特殊环境下埋地大直径管道响应的分析方法,以及基于GIS生命线系统承灾能力的预测进行了研究。目前浅埋管道具有大管径、大变形、多工况的特点,这些特征使得研究生命线
<正>"音乐是诗歌至关重要的助手,只有白痴才会拒绝它的帮助。"[1]美国19世纪最杰出的诗人埃德加·爱伦·坡在其最精辟、最独到的诗歌美学理论著作《诗歌原理》中说:"在节奏、