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背景和目的膀胱癌是泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤,近年来在西方国家发病率呈缓慢下降趋势,但是近十年在我国的发病率及死亡率却呈逐年上升趋势。另一方面,膀胱癌需终生监测复发情况,膀胱癌的诊断、治疗、及复发监测等医疗费用在所用肿瘤中是最高的,给社会和患者带来沉重的经济负担。膀胱镜检查和尿脱落细胞学检查是膀胱癌复发监测最常用的手段,但是膀胱镜检查属侵入性检查,且费用较高,而尿脱落细胞学检查虽然特异性较高,但是敏感性较低,因此需要研究新的诊断和复发监测手段。尿液修饰核苷作为非常有潜力的肿瘤标志物对于多种肿瘤的诊断、病情检测及预后评估具有重要意义。我们前期实验发现,1-甲基腺苷(m1A)和1-甲基次黄苷(1-mel)联合检测膀胱癌具有很高的灵敏度(92.45%)和特异性(87.50%)。因此,尿液修饰核苷可能成为有潜力的膀胱癌诊断和复发监测的标志物。m1A由m1A58甲基转移酶(hTrm6P/hTrm61P)催化t RNA58位的腺苷(A)生成,其中hTrm61p由TRMT61A基因编码,是其中的催化亚基。在后续实验中发现TRMT61A、hTrm61p在膀胱癌组织中高表达。应用RT-qPCR技术在人膀胱癌细胞系T24、5637、EJ中筛选出TRMT61A高表达细胞株5637,在5637细胞中应用siRNA技术沉默TRMT61A后,细胞增殖减慢、凋亡增多、侵袭性减弱。说明TRMT61A在膀胱癌的发生发展中发挥重要作用。本研究在前期工作的基础上,应用基因芯片技术检测在5637细胞中沉默TRMT61A对基因表达谱的影响,并应用panther数据库对其中的差异基因进行Go Term分析,研究TRMT61A在膀胱癌发生发展中可能的信号通路。基因芯片中差异倍数超过5的有四个基因,其中FABP4在沉默TRMT61A后表达明显升高。大量研究表明,FABP4在膀胱癌组织中低表达,且与病理分级、分期及预后较差明确相关,因此应用RT–qPCR技术验证在5637细胞中沉默TRMT61A基因对FABP4表达的影响。方法1基因芯片共分两组:Lip2000(lipofectamineR2000处理的5637细胞),siRNA组(lipofectamineR2000转染TRMT61A-siRNA的5637细胞)。在5637细胞中,siRNA技术沉默TRMT61A,RT–qPCR技术检测沉默效率,当沉默效率至约70%时,送检基因芯片,检测基因表达谱的改变。利用panther数据库,对差异基因进行Go Term分析。2 RT–qPCR技术验证5637细胞中沉默TRMT61A对FABP4 mRNA表达的影响实验共分四组:blank组(未做任何处理的5637细胞),Lip2000(lipofectamineR2000处理的5637细胞),NC组(lipofectamineR2000转染negative control-siRNA的5637细胞),siRNA组(lipofectamineR2000转染TRMT61A-siRNA的5637细胞)。3 TRMT61A、FABP4在膀胱癌组织中的相对表达水平选取郑州大学第一附属医院泌尿外科2014年1月至2016年1月经病理证实为膀胱癌的30例,RT–qPCR技术检测TRMT61A与FABP4 mRNA在癌组织和癌旁组织的相对表达水平。结果1基因芯片结果将基因的探针信号与背景信号有显著差异,且标准化信号值>8作为筛选阈值,确定有效表达的基因数目。差异倍数(FC),以FC>2或FC<0.5为显著性差异标准。FC>2,即沉默TRMT61A基因后明显上调表达的基因,共99个;FC<0.5,即沉默TRMT61A基因后明显下调表达的基因,共107个。其中FC>5或FC<0.2基因共有4个:STC2、FABP4、KRT13、ERMP1。Go Term分析结果表明:差异基因发挥多种分子功能、参与多种生物过程、构成多种细胞组分、影响多种信号通路,对细胞产生广泛影响。2RT–qPCR技术验证5637细胞中沉默TRMT61A对FABP4 mRNA表达的影响与NC组(0.999±0.041)相比,siRNA组(0.563±0.050)TRMT61A mRNA表达显著下调,差异具有统计学意义(P<0.05),TRMT61A的沉默效率为43.7%。与NC组(1.000±0.019)相比,siRNA组(2.260±1.167)FABP4mRNA表达显著上调,差异具有统计学意义(P<0.05)。3TRMT61A、FABP4 mRNA在30例膀胱癌组织样本的相对表达水平30例膀胱癌组织样本TRMT61A mRNA在癌组织中表达明显升高,与癌旁组织相比(1.000±0.000),在癌组织的表达水平为2.076±1.349,差异有统计学意义(P<0.05)。28例膀胱癌组织样本,FABP4 mRNA在癌旁组织的表达明显降低,与癌旁组织(1.000±0.000),在癌组织的表达水平为0.568±1.420,差异有统计学意义(P<0.05)。结论1在5637细胞中siRNA沉默TRMT61A能显著改变基因表达谱25637细胞中siRNA沉默TRMT61A可以明显上调FABP4 mRNA的表达。说明下调TRMT61A发挥抗癌作用是通过上调FABP4的表达发挥作用的。因此,抑制TRMT61A的表达可能成为抗膀胱肿瘤药物研发的潜在靶点。