南瓜杂交组合对甜瓜的嫁接适用性评价及南瓜属SSR标记开发

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dyflovedyf
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甜瓜(Cucumis melo L.)是世界性的重要园艺作物,栽培面积大,经济价值高。但在甜瓜生产过程中由土传性病害的蔓延引起的连作障碍严重制约了甜瓜产业的发展,采用嫁接可以提高对土传病害的抗性。甜瓜嫁接所用的砧木主要是南瓜,包括中国南瓜(Cucurbita moschata)、印度南瓜(.Cucurbita maxima)以及它们的种间杂交种。但是,在使用南瓜作为砧木嫁接甜瓜提高抗性的同时,会对甜瓜的果实品质产生影响。因此,选育适宜甜瓜嫁接的砧木组合对于甜瓜生产显得尤为重要。另外,南瓜作为砧木具有其特殊性,往往不能通过全生育期的表型性状观察来判定其种质纯合度,因此在南瓜全基因组公布之前,利用转录组测序序列开发南瓜属SSR标记显得尤为必要。本研究通过对南瓜属种质资源的评价、南瓜属自交系嫁接甜瓜的适用性评价、南瓜属杂交组合配制及其嫁接甜瓜的适用性评价和南瓜属SSR标记开发等研究,旨在选育适宜甜瓜嫁接的砧木组合,为嫁接甜瓜生产提供种质材料支撑,并对南瓜属种质资源及砧木组合杂种纯度进行快速鉴定,所取得主要结果如下:1、对来自于国家蔬菜种质资源库中期库并经自交纯化的89份南瓜属种质资源的表型性状进行调查与评价,调查评价指标包括主蔓长/粗、叶片长/宽、老瓜横纵径、老瓜单瓜重、种子长/宽及种子千粒重等20个数量性状及嫩瓜皮色、老瓜皮色及瓜形等28个质量性状。48个表型性状的变异系数在0.11-1.28之间,平均变异系数为0.41,种子周缘的变异系数最大,为1.28:瓜梗切面形状的变异系数最小,为0.11;根据其表型性状及田间生长状况综合评价,筛选出29份南瓜自交系作为甜瓜嫁接适用性评价的砧木材料。2、利用筛选得到的29份南瓜自交系材料,其中27份中国南瓜(cucrbita moshcata),2份印度南瓜(cucurbita maxima),并以2份南瓜类型商业品种‘青研一号’和‘超级拳王’为对照砧木,以厚皮甜瓜‘伊丽莎白’为接穗进行嫁接,以甜瓜自根苗作为对照。嫁接前对砧木苗期子叶长/宽、下胚轴粗细等与嫁接紧密相关的表型性状进行测定,嫁接后评价各砧木嫁接甜瓜后的亲和性,及其对接穗植株长势、果实品质和产量的影响。同时,对29份材料进行根腐病抗性鉴定,综合评价后从中筛选出适合甜瓜嫁接的9份南瓜自交系材料作为甜瓜嫁接砧木新组合配制的亲本材料。3、利用筛选得到的9份南瓜自交系(中国南瓜7份,印度南瓜2份),配制了25个杂交组合。其中,印度南瓜和中国南瓜种间杂交组合13个,中国南瓜种内杂交组合12个。10℃/5℃条件下各杂交组合幼苗对低温表现出了较好的耐受性,并且种间杂交组合普遍比种内杂交组合表现出了更强的低温耐受性。2014年秋季实验(武汉)用厚皮甜瓜品种‘伊丽莎白’做接穗,2015春季实验(三亚)用当地主栽品种‘南海蜜’做接穗,评价了25个杂交组合的下胚轴粗细、嫁接亲和性,及其对接穗植株长势、果实品质和产量等的影响,从中筛选出综合表现较好的砧木组合2份。4、对本课题组的南瓜转录组测序数据进行分析,利用搜索软件共搜索得到潜在的SSR标记位点747个。利用Contig序列设计引物211对,并以收集得到的61份南瓜类型商业砧木及4份南瓜自交系为材料进行聚丙烯酰胺凝胶电泳验证其多态性,筛选电泳条带清晰且具有明显多态性的标记引物,通过验证筛选得到具有多态性的引物110对。分析SSR位点信息及多态性引物特性,结果显示,在多态性标记位点中,二、三核苷酸重复位点最多,分别占26.36%和62.73%,多核苷酸重复位点较少,只占10.9%;另外,110对引物的平均多态信息量(PIC值)为0.34,PIC值最大的为引物LySSR102,为0.50:最小的是LySSR157,为0.09;利用110对引物对65份南瓜种质的扩增结果进行聚类分析,在相似系数0.57处,65份南瓜种质可以分为两类,一类为印度南瓜或印度南瓜与中国南瓜的种间杂交种,一类为中国南瓜或中国南瓜的种内杂交种,经筛选得到的多态性引物经过进一步评价筛选可应用于砧木新组合指纹图谱的构建及南瓜属砧木杂种纯度鉴定等。5、利用开发的南瓜属SSR分子标记,从中选出多态性高、带型好、扩增产物大小差异在50bp左右、引物间不能相互配对和形成发卡结构的SSR标记位点组合LySSRO1、 LySSR90、LySSR131,对PCR反应体系和扩增程序进行优化,建立了以上3个SSR位点的多重PCR技术体系。并使用LySSR69、LySSR14、LySSR131; LySSR70、LySSR63、LySSR131;LySSR121、LySSR59、LySSR138;LySSR210、LySSR100、 LySSR138四组含3个SSR位点的引物组合对优化的南瓜属多重PCR体系进行验证,结果表明优化的多重PCR体系扩增效果较好。南瓜属多重PCR技术显著提高了SSR标记的分析效率,可以用于南瓜品种鉴定、指纹图谱构建和杂种纯度鉴定等领域。6、利用已开发的南瓜属SSR标记LySSR121和LySSR138,使用2份南瓜亲本材料及其杂交F1代DNA进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR),分析PCR过程中的溶解曲线,探索南瓜属SSR-HRM技术在南瓜属种质资源遗传多样性及指纹图谱构建和杂种纯度鉴定中的应用。结果表明,与传统电泳检测方法相比较,运用SSR-HRM技术可以更加高效快速的对南瓜属种质资源的遗传多样性及杂种纯度进行鉴定。
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