前列腺癌中Glypican-3蛋白的表达及意义

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目的:众所周知,前列腺癌是严重威胁男性健康的恶性肿瘤。2008年美国有186320例新增患者,并有28660例患者死于前列腺癌,前列腺癌已成为危害男性健康的第一位肿瘤。在我国,随着人口老龄化、饮食结构和生活方式的不断改变,前列腺癌的发病率和死亡率也有逐年上升的趋势,故前列腺癌的早期诊断和早期治疗显得极为重要。目前诊断前列腺癌的基本方法是直肠指检、经直肠超声和血清前列腺特异性抗原(prostate-specific antigen,PSA),但仍存在一定的漏诊率。肿瘤标志物在肿瘤诊断方面有着敏感性高、特异性强的优点,它的广泛应用对恶性肿瘤的诊断、鉴别诊断、治疗及判断预后提供了有力的临床依据。目前对前列腺肿瘤标志物的研究进展较为缓慢,尚无法满足临床需求。因此,寻求更多有效提高辅助诊断前列腺癌的肿瘤标志物有重要意义。磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(Glypican-3GPC-3)是硫酸乙酰肝素糖蛋白(heparan sulfate ProteoglycanHAPG)家族中的一员。目前认为HAPG中的HS链与生长因子及其受体、细胞外基质蛋白等大量生物效应分子相互作用,参与调节细胞形态及其粘附、增殖、迁移、存活和分化等作用,因此考虑GPC-3可参与上述细胞调节作用。自1996年被发现以来GPC-3,其作为肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma HCC)肿瘤标志物的研究较为广泛。α-胎儿蛋白(AFP)在肝细胞癌中的诊断意义已被充分肯定。Abdelgawad等用ELISA法分析60例样本血清GPC-3和α-胎儿蛋白(AFP)(包括40例肝癌、10例肝硬化病人及10例健康对照),RT-PCR扩增方法检测GPC-3和AFP在mRNA水平的表达并进行分析,结果表明GPC-3在肝细胞癌中的敏感性和特异性均高于AFP。研究显示GPC-3基因在不同癌组织细胞中具有不同的作用和意义。本实验欲研究GPC-3蛋白在前列腺癌中的表达和意义,为临床前列腺癌的诊断提供辅助手段。方法:实验选取1998年至2012年白求恩国际和平医院泌尿外科前列腺癌和前列腺增生组织标本各30例。实验组前列腺腺癌30例,患者年龄56岁~89岁,平均73岁。前列腺体积平均73.30m(l13.89ml~192.20ml),血清总PSA(电化学发光法)平均51.8ng/ml(6.6ng/ml~177ng/ml),按Fuhrman组织学分级:高分化4例,中分化8例,低分化18例;Gleason评分平均7.1分(5分~9分)。UICC分期:Ⅰ+Ⅱ期:22例;Ⅲ+Ⅳ期:8例;有骨转移5例,盆腔转移1例。另选同期前列腺增生组织标本30例作为对照组,患者年龄43岁~79岁,平均69.8岁,前列腺体积平均77.10ml(13.84ml~189.20ml);血清总PSA平均4.3ng/m(l1.8ng/ml~15.3ng/ml)。标本经10%甲醛固定,石蜡常规包埋,5um连续切片2张,GPC-3免疫组化染色。免疫组化按P-V法进行操作。设阳性对照和阴性对照,以试剂盒自带的阳性片免疫组化染色结果为阳性对照,以PBS替代一抗,前列腺癌组织免疫组化染色结果为阴性对照。结果判定:GPC-3阳性表达标准以细胞质着色为准,呈棕黄色颗粒,细胞染色强度明显高于背景呈棕黄色者为阳性。采用半定量计分法判定,选取5个高倍镜视野(400倍),按切片中阳性细胞比例及染色深浅分别记0~4分:阳性细胞<5%为0分,5%~25%为1分,26%~50%为2分,51%~75%为3分,>75%为4分;按染色深浅分别记0~3分,染色深度以多数细胞为准,无阳性细胞为0分,黄色为1分,棕黄色为2分,棕褐色为3分;总积分为阳性细胞的百分率得分与免疫染色强度的得分的乘积,按总积分将结果分成4级:0分为(-),1~2分为(+),3~4分为(++),5~12分为(+++)。其中(-)和(+)为低表达,(++)和(+++)为高表达。统计学分析:采用SPSS13.0统计学软件对实验数据进行统计分析,采用四格表卡方检验,P<0.05,具有统计学意义。结果:1GPC-3蛋白在前列腺癌组织中高表达(++、+++)占63.3%(19/30)明显高于前列腺增生20%(6/30),两组差异明显,有统计学意义。2GPC-3蛋白在Gleason评分大于和等于7分的前列腺癌组织中高表达73.0%(19/26),明显高于Gleason评分小于7的前列腺癌组织0(4),两组差异明显,有统计学意义。3在30例前列腺癌病人血清前列腺特异性抗原(total prostate specificantigen, TPSA)数值可看出,随着TPSA数值的升高,GPC-3蛋白高表达的比例有上升的趋势。结论:1GPC-3蛋白在前列腺癌组织中高表达率明显高于前列腺增生,表明GPC-3蛋白与前列腺癌的发生、发展可能存在一定关系。其机理有待于进一步研究。2GPC-3蛋白在Gleason评分大于和等于7与小于7的两组前列腺癌组织中表达存在明显差异,表明GPC-3蛋白可能与前列腺癌的分化、分级及恶性程度有关。
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