绵羊多胎性状候选基因群及其互作效应的研究

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绵羊的产羔数性状属于阈性状,受包括主效基因在内的众多基因控制。目前,国内外学者已对影响绵羊产羔数众多基因的单基因效应进行了大量的分析,但仍未对其它少数候选基因以及众多候选基因之间的互作效应进行深入研究。因此,本研究以湖羊(171只)、小尾寒羊(54只)和杜泊羊(47只)共272只绵羊为主要研究对象,在对影响绵羊产羔数性状众多候选基因的单基因效应进行全面分析的基础之上,进一步揭示基因互作效应,并对产羔数与母羊体重性状表型负相关的遗传机制进行探索。主要研究内容包括:(1)采用混合DNA池法,利用飞行时间质谱生物芯片系统(Sequenom MassArray)对绵羊B4GALNT2和Zar1基因的遗传变异进行分析。(2)利用飞行时间质谱生物芯片系统,对影响绵羊产羔数的17个主要候选基因(FecB、GDF9、MTNR1A、ESR、RBP4、PRL、PRLR、FecXL、INHA、INHBA、BMP4、FSH-β、IGF-1、IGF-2、PGR、RXRG、Zar1)中的20个重要SNPs与产羔数的单独效应进行分析。(3)对影响绵羊产羔数的17个主要候选基因中的20个重要SNPs与产羔数的互作效应进行了分析。(4)对17个候选基因中重要SNPs与母羊体重性状关联性进行分析。以上研究的主要结果如下:(1)对绵羊B4GALNT2全基因进行扫描,未发现任何变异。在绵羊Zar1基因上首次发现两个多态位点(T5071C、T5138C),均构成3种基因型。在湖羊、小尾寒羊和杜泊羊中,2个位点的基因型相同。优势基因型均为CT型,基因型频率分别为0.48、0.51、0.57;优势等位基因均为T,基因频率分别为0.64、0.55、0.65。PIC结果(0.35、0.37、0.35)显示群体均为中度多态;He结果(0.46、0.50、0.46)显示群体均为中高度杂合状态;有效等位基因数Ne分别为1.85、2.00、1.84;?2检验三种群体均处于Hardy-Weinberg平衡状态。与绵羊经济性状关联分析显示该位点三种基因型对绵羊所有生产性状影响均不显著(p>0.05)。(2)对三个绵羊群体的17个候选基因的20个重要SNPs位点进行分析。发现3个SNP位点与产羔数密切相关。首先,证实多胎主效基因FecB与小尾寒羊经产产羔数密切关联。其次,MTNR1A基因的G605A位点在小尾寒羊群体中仅存在GG、AG两种基因型,首次观察到MTNR1A(G605A)突变位点对小尾寒羊经产产羔数有显著影响,AG基因型母羊比GG型平均多产羔0.48只(p=0.045<0.05)。此外,首次发现湖羊GDF9(G477A)位点的3种基因型频率分别为AA(0.29)、GA(0.53)、GG(0.18),A为优势等位基因,频率为0.55;AA型母羊分别比GA和GG型平均多产羔0.35和0.11只(p=0.040<0.05)。(3)对影响绵羊产羔数的17个候选基因的20个重要SNPs位点的基因互作效应进行分析,发现有显著聚合效应的7个位点:FecB(A746G)、GDF9(G477A)、ESR(C363G)、PGR(C70T)、MTNR1A(G605A)、TGF-1(G4988A)和PRLR(G304A)。它们的互作效应分析结果主要是:湖羊群体(171只)中:①GDF9(G477A)和ESR(C363G)基因组合中GG-GG基因型母羊比GA-CC基因型组合平均多产羔1.49只(p=0.041<0.05);②FecB(A746G)和ESR(C363G)基因组合中AG-GG基因型母羊比AG-GC基因型组合平均多产羔2.22只(p=0.017<0.05)。小尾寒羊群体(54只)中:①PGR(C70T)和MTNR1A(G605A)基因组合中CT-AG基因型母羊比TT-AG基因型组合平均多产羔1.49只(p=0.015<0.05);②PGR(C70T)和PRLR(G304A)基因组合中CT-GG基因型母羊比CC-AA基因型组合平均多产羔1.09只(p=0.025<0.05)。三品种合并群体(272只)中:GDF9(G477A)和IGF-1(G4988A)基因组合中AA-AA基因型母羊比GA-AA基因型组合平均多产羔0.67只(p=0.029<0.05)。(4)首次对影响绵羊产羔数的17个候选基因的20个重要SNPs位点与母羊体重性状关联分析发现:①MTNR1A(G605A)单基因效应分析,AG基因型对应产羔数最多但成年母羊体重显著降低,小尾寒羊产羔数与母羊体重之间呈显著负相关(r=-0.081,p=0.019<0.05);②GDF9(G477A)和ESR(C363G)聚合基因型效应分析,基因型组合GG-GG型产羔数最多但成年母羊体重显著降低,湖羊产羔数与母羊体重之间呈显著负相关(r=-0.865,p=0.023<0.05)。综上所述,本研究首次对绵羊B4GALNT2、Zar1基因遗传变异进行分析,在Zar1基因中发现2个与三个绵羊品种生产性状没有显著相关的SNP位点。对17个候选基因20个SNPs位点单基因效应和互作效应进行分析,首次发现2个SNP位点,5种基因互作类型与绵羊产羔数密切关联。此外,发现携带MTNR1A(G605A)、GDF9(G477A)/ESR(C363G)基因组合母羊产羔数与体重间呈现显著负相关。因此,得出以下主要结论:(1)绵羊B4GALNT2、Zar1基因在进化中相对比较保守;(2)GDF9(G477A)位点以及2种基因互作[GDF9(G477A)和ESR(C363G)、FecB(A746G)和ESR(C363G)]可作为湖羊产羔数选择的可用分子标记;而MTNR1A(G605A)位点以及2种互作[PGR(C70T)/MTNR1A(G605A)、PGR(C70T)/PRLR(G304A)]可作为小尾寒羊产羔数选择的可用分子标记;(3)应用分子标记辅助选择时,应该注意避免相关分子标记的负面效应。
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