稻米是亚洲国家和一些西方国家的主食。在谷物类蛋白中,大米蛋白质量最优。然而,在一部分人群中,大米蛋白也可诱发过敏反应。14-16 kDaα-淀粉酶/胰蛋白酶抑制剂是大米中的主要过敏原。本研究采用基因工程技术获得对应14-16 kDaα-淀粉酶/胰蛋白酶抑制剂的重组蛋白RAG2,并利用重组蛋白制备抗14-16 kDaα-淀粉酶/胰蛋白酶抑制剂的兔多克隆抗体,建立间接竞争Elisa法,用于筛选不同的大米品种,期待获得具有低致敏性的大米品种。研究的主要方法及结论如下:1.利用基因合成技术合成14-16 kDaα-淀粉酶/胰蛋白酶抑制剂的基因RAG2,选用pSUMO-Mutant质粒载体和大肠杆菌E.coliBL21(DE3)pLysS作为表达系统,将基因连接到pSUMO-Mutant载体上,构建pSUMO-RAG2重组质粒,转化至大肠杆菌ER2925中进行大量克隆扩增,提取质粒进行限制性内切酶酶切分析,显示合成的RAG2基因序列正确。2.pSUMO-RAG2重组质粒在E.coli BL21(DE3)pLysS中成功诱导表达,追踪SUMO-RAG2融合蛋白,发现它是细胞内的不溶性的包涵体表达;对包涵体进行变性与复性,并通过Ni柱进行亲和层析获得SUMO-RAG2融合蛋白。3.免疫家兔,制备出抗大米过敏原14-16 kDaα-淀粉酶/胰蛋白酶抑制剂的多克隆抗体,其效价高达1:320,000。4.收集江西28个水稻品种,提取盐溶性蛋白,采用SDS-PAGE电泳和基于抗RAG2多克隆抗体的免疫印迹法检测28个品种的过敏原RAG2含量,结果初步显示,这28个品种中不与抗RAG2的抗血清反应,最后选用间接竞争Elisa方法测出每个品种的IC50,从而筛选出抗原性低的大米品种。