肝癌循环microRNA标志物的筛选及其诊断和预后意义的研究

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【目的】  本研究基于对癌症和肿瘤基因图谱(TCGA)中肝癌数据库的大样本数据的分析,以寻找肝癌的血清miRNA标志物,为肝癌的诊断和疾病的预后监测提供更加灵敏、可靠的生物学指标,也为肝癌的治疗提供新的思路与靶点。  【方法】  通过student’s t检验对TCGA数据库中的372个样本(包括331名肝癌确诊患者和41名癌旁对照)的1042种miRNA的表达数据进行初步分析,寻找有表达差异的miRNA,并进一步挑选出能同时存在于血清中的miRNA。通过构建受试者工作特征(ROC)曲线,评价其作为肝癌诊断标志物的潜力,并从中挑选了4种miRNA进行后续研究。  用qRT-PCR方法检测44例血清样本中4种目标miRNA表达量,验证其诊断肝癌的效果,并对这 4 种 miRNA 可能存在的组合方式进行分析;然后通过Kaplan-Meier生存分析,分析4种miRNA与肝癌预后之间的关联;再用KEGG通路分析预测4种miRNA可能参与的生物学功能及相关通路。  【结果】  经过对372例样本的1042种miRNA的筛选,有221个miRNA在HCC和癌旁对照之间的表达差异明显,其中有 72 个 miRNA 是能在血清中检测到。对这些循环miRNA进行ROC分析,发现其中有25种miRNA具有较强的肝癌诊断能力,我们从中挑选了miR-29c、miR-33b、miR-326和miR-497这4种miRNA进行后续研究。  44例血清样本的qRT-PCR结果显示,4种miRNA在肝癌病人和正常对照的血清中的表达均存在差异,其中miR-29c的表达差异最为明显,其诊断效果优于这4种miRNA的其他组合方式。  对4种miRNA的生存分析显示,高表达的miR-326和miR-33b预示着极低的5年生存率,是预后不良的可能因素。对4种miRNA进行KEGG通路分析,发现4种miRNA参与了Wnt、p53、mTOR等肿瘤相关信号通路。  【结论】  循环 miR-29c、miR-33b、miR-326 和 miR-497 能作为肝癌诊断的生物标志物,其中单独的miR-29c的诊断意义最强,是可能的诊断指标,其诊断效能优于这4种miRNA的其他组合方式。  肿瘤组织中高表达的miR-326和miR-33b预示着极低的5年生存率,是预后不良的可能因素。其中又以miR-326最为显著,高低表达miR-326的5年生存率分别为8.6%、61.2%。
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