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在医学科技飞速发展的今天,肺癌严重威胁着人类的健康,尽管以手术治疗、化学治疗、放射治疗、靶向治疗以及免疫治疗为核心的综合治疗方式极大程度地提高了肺癌的治疗效果,然而肺癌患者的五年生存率依然很低。肺癌里面非小细胞肺癌(NSCLC)占绝大部分,非小细胞肺癌细胞的增殖凋亡、侵袭和迁移是非常复杂的生物学过程,其对肺癌患者的生存质量和生存率都有直接的影响。微小核糖核酸(microRNA,miRNA,miR)是一类普遍存在于生物体内的小的非编码单链RNA,包含约19-22个核苷酸,能够特异性地与目标基因的mRNA 3’-UTR区通过互补配对进行结合,从而导致靶基因的mRNA降解或翻译受到抑制,影响下游信号通路的活性,最终影响细胞学行为。miRNA的表达失调和功能障碍对肿瘤的生长和进程有着重要的影响。MiR-34b是肺癌相关miRNA之一,但是miR-34b在肺癌中发生及发展分子机制还有待进一步研究。研究目的:(1)探讨miR-34b在NSCLC癌组织及癌旁组织中表达水平的变化;(2)探讨miR-34b在不同肺癌细胞系中表达水平的变化;(3)探讨miR-34b表达对肺癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响与作用机制;(4)为非小细胞肺癌的诊断和治疗提供理论基础。方法:本研究应用RT-qPCR技术检测miR-34b在NSCLC癌组织及癌旁组织中的表达水平差异,在体外,通过RT-qPCR检测不同非小细胞肺癌细胞系与肺上皮细胞中miR-34b的表达情况,筛选出具有代表性的肺癌细胞系(A549)。将miR-34b的mimics转染到A549细胞中,RT-qPCR验证转染效率;运用MTT、流式细胞术、划痕实验和transwell实验等方法检测miR-34b过表达后,肺癌细胞增殖凋亡和侵袭迁移能力的变化情况;同时,我们为深入分析miR-34b调控肺癌细胞的分子机制,利用生物信息学方法对miR-34b作用的潜在功能靶点进行预测,推测出YAF2基因有可能是miR-34b的靶点,初步探讨miR-34b调控YAF2抑制肺癌侵袭迁移的机制。本研究观察到:1.与癌旁组织比较,miR-34b在NSCLC癌组织中表达显著下调(P<0.01);2.正常支气管上皮细胞系(BEAS-2B)与A549、NCI-H1299、H292、H460肺癌细胞株间miR-34b表达水平比较:(1)与正常肺细胞系(BEAS-2B)进行比较,A549、NCI-H1299、H292、H460肺癌细胞株的miR-34b表达水平呈现不同程度的降低,有显著性差异(P<0.05);(2)其中正常肺细胞系(BEAS-2B)与A549肺癌细胞株间比较,miR-34b表达水平呈现明显的降低,有非常显著性差异(P<0.01)(3)与其它三种肺癌细胞株NCI-H1299、H292、H460miR-34b表达水平进行比较,A549的miR-34b表达水平最低,有非常显著性差异(P<0.01);3.与对照组和A549-mimics-NC组比较,A549-miR-34b mimics组miR-34b表达水平显著上调,差异非常显著(P<0.01);4.与对照组和mimics-NC比较,在转染24h后,A549-miR-34b mimics组肺癌细胞株细胞体外增长能力显著降低(P<0.05),在转染48 h后,A549-miR-34b mimics肺癌细胞株细胞体外增殖能力非常显著降低(P<0.01);5.与Control组(8.10%±0.72%)和A549-mimics-NC组(8.31%±0.67%)比较,转染miR-34b mimics的肺癌细胞株A549-miR-34b mimic的细胞凋亡率明显上升(P<0.01);6.与Control组和A549-mimics-NC组比较,A549-miR-34b mimics组肺癌细胞株体外侵袭能力显著降低,差异具有非常显著性差异(P<0.01);7.与Control组和A549-mimics-NC组比较,A549-miR-34b mimics组肺癌细胞株体外迁移能力显著降低,差异有非常显著性差异(P<0.01)。8.转染miR-34b mimics后,与对照组和A549-mimics-NC组比较,过表达miR-34b肺癌细胞株A549-miR-34b mimics组细胞凋亡相关因子Caspase 3基因mRNA和蛋白水平表达都显著上调(P<0.05);9.与对照组和A549-mimics-NC组比较,过表达miR-34b肺癌细胞株A549-miR-34b mimics组JAK2、STAT3的mRNA表达水平无显著性差异(P>0.05);10.与对照组和A549-mimics-NC组比较,过表达miR-34b肺癌细胞株A549-miR-34b mimics组中p-JAK2、p-STAT3的表达显著降低(p<0.05);11.与对照组和A549-mimics-NC组比较,过表达miR-34b肺癌细胞株A549-miR-34b mimics组中MMP2基因mRNA和蛋白水平表达水平都显著降低(P<0.05)。12.生物信息学方法发现miR-34b作用的靶基因为YAF2基因;13.双荧光报告基因检测法发现:YAF2的3’UTR与miR-34b能够相互作用,miR-34b表达与YAF2表达呈负相关(r=-0.5721,95%CI=-0.7500~-0.3170,R squared=0.3273,P<0.01)。结论:(1)肺癌组织中miR-34b表达水平显著降低;(2)过表达miR-34b能够显著抑制肺癌腺癌细胞株A549细胞体外增殖、迁移、侵袭潜能,并促进肺癌细胞凋亡;(3)miR-34b过表达显著下调侵袭迁移相关因子JAK2、STAT3磷酸化蛋白的表达,说明miR-34b过表达后,能够抑制JAK/STAT3信号,抑制肺癌细胞的浸润迁移;(4)YAF2基因是miR-34b的下游靶基因,过表达miR-34b能显著抑制YAF2基因表达,并抑制肺癌细胞的增殖,侵袭及迁移。