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目的本研究拟用呼吸道合胞病毒合并肺炎克雷伯菌感染诱发SD大鼠引起肺炎,观察SD大鼠肺组织病理变化,检测TLR4通路相关因子的表达情况,初步探讨其与TLR4-NF-kB信号转导通路的关系。方法60只雄性SD大鼠随机分为四组:对照组、RSV组、Kp组及RSV+Kp组,每组各15只。通过滴鼻感染法处理各组SD大鼠,于第0、1、3、5、7 d相同时间段测量其体重、肺指数(LI),H&E染色观察肺部病理变化,RT-PCR检测TLR4及NF-kB的m RNA表达情况,Western blot检测NF-kB蛋白质的表达丰度,ELISA检测肺泡灌洗液中TNF-a和IL-1b炎性因子的分泌量。结果(1)肺指数:与正常对照组相比,RSV组、Kp组和RSV+Kp组SD大鼠LI呈逐渐递增趋势,RSV组和Kp组在感染后第3、5天升高,差异有统计学意义(P<0.05),第7天显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);与RSV组和Kp组相比,RSV+Kp组SD大鼠LI在感染后随时间延长逐渐升高,第5、7天差异有统计学意义(F=7.027,P<0.05)。(2)肺组织病理:正常对照组SD大鼠肺泡结构清楚,壁薄无充血,肺间质无炎症细胞浸润。RSV组和Kp组在感染后第3天开始出现弥漫性肺泡间隔增厚与肺泡壁破坏,且均随感染时间的延长,肺泡结构破坏逐渐加重。而RSV+Kp组从第1天开始肺组织就有炎性细胞浸润,并且在感染后同一时期较RSV组和Kp组更为严重。(3)m RNA转录水平:正常对照组SD大鼠肺组织中TLR4 m RNA、NF-kB m RNA表达很低;随着感染时间的延长,RSV组、Kp组和RSV+Kp组TLR4 m RNA、NF-kB m RNA表达量逐渐增加,有时间依赖性。RSV组TLR4 m RNA表达在感染后第5、7 d升高,差异统计学意义(P<0.01),NF-kB m RNA在感染后第5 d升高,差异有统计学意义(P<0.05),第7 d显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);Kp组TLR4 m RNA表达在感染后第3 d升高,差异有统计学意义(P<0.05),第5、7 d显著升高,差异有统计学意义(P<0.01),NF-kB m RNA在感染后第3d升高,差异有统计学意义(P<0.05),第5、7 d显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)。RSV+Kp组较RSV组TLR4 m RNA、NF-kB m RNA表达在感染后第5、7 d升高,差异有统计学意义(P<0.05);较Kp组TLR4 m RNA表达在感染后第7 d升高,差异有统计学意义(P<0.05),NF-kB m RNA表达在感染后第5、7 d均升高,差异有统计学意义(F=6.373,P<0.05)。(4)NF-kB蛋白表达:正常对照组中SD大鼠肺组织中NF-κB蛋白水平表达量较低,而在RSV组、Kp组和RSV+Kp组NF-κB蛋白随着感染时间的延长表达不断增加。RSV组在感染后第5天明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),第7天显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);Kp组NF-kB蛋白表达Kp组NF-kB蛋白表达在感染后第3天明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),在感染后第5、7天显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);与RSV组相比,RSV+Kp组NF-kB蛋白在感染后第3、5、7天升高有统计学意义(P<0.05),与Kp组相比,RSV+Kp组NF-kB蛋白在感染后第5、7天升高差异有统计学意义(P<0.05)。(5)TNF-a、IL-1b含量:正常对照组中TNF-α和IL-1b含量较低,而在RSV组、Kp组和RSV+Kp组TNF-a、IL-1b含量随着感染时间点的延长逐渐增加,有时间依赖性。RSV组和Kp组TNF-α在感染后第5、7天明显升高,差异有统计学意义(F=9.137,P<0.05);与RSV组和Kp组相比,RSV+Kp组TNF-a含量较RSV组在感染后第5天升高,差异有统计学意义(P<0.05),第7天显著升高,差异有统计学意义(P<0.01),较Kp组第5、7天明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。RSV组和Kp组IL-1b含量在感染后第5、7 d均显著升高,差异有统计学意义(F=8.737,P<0.01);与RSV组和Kp组相比,RSV+Kp组IL-1b 含量在感染后第5、7天均显著升高,差异有统计学意义(F=8.871,P<0.01)。结论(1)通过滴鼻法建立RSV合并Kp感染诱发SD大鼠引起肺炎的动物模型可行。(2)RSV和Kp混合感染具有协同作用,加重肺部炎症。(3)RSV合并Kp感染可能通过TLR4-NF-?B途径诱导肺部防御细胞释放细胞因子TNF-?和IL-1?等。