论文部分内容阅读
肝细胞癌是全球最常见的恶性肿瘤之一,也是全球肿瘤相关死亡的主要病因,其发生发展是一个多因素多阶段的过程。RIT1是RAS亚家族成员,其44%的序列与Ras（H-RAS,K-RAS和N-RAS）同源,它编码的蛋白与G蛋白结构相似,具有GTP酶活性,参与GTP的循环,通过保守的“开关”机制调节信号转导,激活下游的效应蛋白。RIT1突变在多种疾病和肿瘤中的都有报道,如努南综合征、肺腺癌和髓系白血病。本文阐述了RIT1及其突变体在肝细胞癌生长、转移过程中的功能和机制,为肝细胞癌治疗和预后预测奠定了理论基础。TCGA数据库分析和本实验室90对肝细胞癌组织及配对癌旁肝组织的q PCR检测结果表明,肝细胞癌组织中RIT1的mRNA表达水平明显高于配对癌旁肝组织,生存期分析提示RIT1高表达的患者生存期显著短于RIT1低表达的患者。利用免疫组织化学检测236例肝细胞癌组织中RIT1的蛋白表达并分析其临床意义,RIT1在肝细胞癌组织中的表达与组织学分级以及是否存在肝内转移呈正相关。RIT1存在3种变异体:Isoform 1,2和3,其中Isoform 1和2在肝细胞癌细胞系和组织中均有表达。我们通过测序发现,RIT1 Isoform 1存在Q11E突变。为了进一步探究RIT1在肝细胞癌发生发展中的作用,我们在SMMC-7721、Li-7和Huh7稳定过表达RIT1 Isoform 1(RIT1Q11)、Isoform 1突变体(RIT1E11)以及Isoform 2,在MHCC-97L和HCC-LY10中稳定干扰RIT1。体外功能实验发现,与对照组相比,过表达RIT1Q11、RIT1E11以及Isoform 2均能明显促进肝细胞癌细胞的生长、迁移和侵袭能力;干扰RIT1能明显抑制肝细胞癌的生长、迁移和侵袭。裸鼠肝原位实验结果表明,过表达RIT1能显著增强肝细胞癌细胞的体内成瘤以及肺转移能力。此外我们还发现用索拉菲尼处理MHCC-97L和HCC-LY10后,RIT1的表达增高;在MHCC-97L和HCC-LY10中敲减RIT1,能够增加肝细胞癌细胞对索拉菲尼的敏感性。缺氧条件下培养肝细胞癌细胞系能够上调RIT1的表达,利用si RNA实验证实缺氧通过HIF-1α而不是HIF-2α调控RIT1的表达。双荧光素酶和Ch IP实验显示HIF-1α与RIT1的promoter结合并促进RIT1的转录活性。236例肝细胞癌组织的免疫组化结果表明HIF-1α与RIT1的表达呈正相关。干扰RIT1的表达能够削弱缺氧对肝细胞癌细胞的迁移和侵袭的促进作用。综上所述,RIT1能够促进肝细胞癌细胞的增殖、转移潜能以及对索拉菲尼的耐药。RIT1是HIF-1α的靶基因,在缺氧诱导的肝细胞癌细胞的迁移中起重要作用。本研究首次证实RIT1在肝细胞癌生长、转移及耐药中的重要作用,为肝细胞癌的治疗策略及预后判断提供了实验证据。