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目的:推拿临床应用广泛,具有改善循环,提高代谢的作用。本研究通过对大脑中动脉闭塞大鼠模型及脑卒中后轻度认知障碍患者进行推拿干预,从线粒体生物发生及能量代谢角度入手,探究“通络调神”推拿对卒中后认知障碍的改善作用及其可能的作用机制。方法:1.实验研究:(1)推拿干预对模型大鼠学习记忆能力的影响:160只雄性SD大鼠,随机分40只为假手术组,其余大鼠进行MCAO造模,造模完成后对大鼠进行Zea-longa评分筛选成模大鼠,并将成模大鼠随机分为模型组(MCAO)、治疗组(MAS)。治疗组大鼠给予头部、腹部及四肢推拿治疗,模型组大鼠仅进行抓摸后放回笼中。对大鼠进行Zea-longa神经功能评分、Morris水迷宫,评估大鼠学习记忆功能。(2)推拿干预对模型大鼠神经损伤及海马亚细胞结构损伤的影响:用TTC染色测定大鼠脑梗死体积,Nissl染色评估神经元损伤严重程度,透射电镜检测神经元亚细胞结构损伤及恢复情况。(3)推拿干预对模型大鼠脑线粒体生物发生及能量代谢的影响:取大鼠脑组织匀浆,蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)及RT-PCR检测脑内线粒体生物生成相关蛋白PGC-1α、NRF-1、TFAM的蛋白及基因表达情况。检测线粒体氧化磷酸化复合物蛋白的表达,并通过激光共聚焦、流式细胞术观测线粒体膜电位和荧光素检测ATP的变化情况,评估大鼠脑海马的线粒体生物发生功能及膜电位的维持,ATP的含量,并通过WB评估脑源性神经营养因子(BDNF)在脑海马中的表达情况。(4)推拿干预潜在的作用机制探究:取大鼠左上肢肌肉组织匀浆,检测PGC-1α、FNDC5蛋白表达情况,并检测各组大鼠中大鼠血浆中irisin含量,探索推拿改善大鼠学习记忆能力潜在的治疗作用机制。2.临床研究:将67例中风后轻度认知障碍的患者,随机分为推拿组和对照组,对照组用基础治疗联合认知训练干预,推拿组在对照组认知训练基础上联合“通络调神”推拿治疗,45min/次,5次/周,共干预4周。治疗前后,采用蒙特利尔认知评估量表(Montreal Cognitive Assessment,Mo CA)、简易智能精神状态检查量表(Mini-mental State Examination,MMSE)和改良Barthel指数(modified Barthel index,MBI)对患者认知功能进行评定。对研究所得结果数据通过SPSS26.0统计分析软件进行处理和分析。结果:1.实验研究:(1)分别在第7天和第28天对大鼠进行Zea-longa评分,MAS组大鼠较MCAO组神经缺损改善更加明显;定位巡航测试中MAS组大鼠的平均潜伏期与MCAO组的相应数值相比明显缩短(P<0.05);空间探索测试中,MAS组大鼠穿越目标象限的次数比MCAO组大鼠多(P<0.01)。(2)TTC染色:Sham组无梗死灶,MAS组梗死体积较MCAO组明显减小,差异具有统计学意义;尼氏染色显示Sham组的海马神经元排列整齐、紧凑,很少发现神经元死亡,在MCAO组明显观察到神经元和海马体的损伤,并伴随着海马结构的破坏,推拿治疗后,海马体的损伤得到明显改善。(3)线粒体生物发生相关因子PGC-1α、TFAM和NRF-1的m RNA及蛋白表达水平,与MCAO组大鼠的相应水平相比,MAS组有所增加;较MCAO组大鼠,MAS组大鼠海马线粒体OXPHOS复合蛋白CI-NDUF88、CIII-UQCRC2、CV-ATP5A水平升高,MMP降低抑制(P<0.01),ATP含量显著高于MCAO组的相应ATP浓度(P<0.05)。(4)MAS组大鼠肌肉PGC-1α、FNDC5的蛋白表达水平较MCAO显著提高,血清irisin含量有所升高,脑内BDNF蛋白的表达升高,较MCAO组统计学具有显著差异。(P<0.05)。2.临床研究:通过MMSE、Mo CA量表评估患者的认知水平变化情况,“通络调神”推拿联合认知康复训练显著改善了患者的认知功能障碍,并且疗效优于单独进行认知康复训练,尤其是视空间与执行功能、注意力和计算力上,两组之间存在统计学差异(P<0.05);通过改良巴氏指数量表表明两组患者的日常生活能力均有所提升,且推拿组得分与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)推拿通过PGC-1α-FNDC5/irisin-BDNF,诱导海马区线粒体生物发生,拯救能量不足,从而改善中风后神经损伤导致的学习记忆功能障碍。(2)“通络调神”推拿联合认知康复训练治疗卒中后轻度认知障碍,可明显提升患者的认知功能及日常生活活动能力,表明“通络调神”推拿治疗卒中后认知障碍具有临床有效性。