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番茄(Solanum lycopersium)是目前我国栽培面积最大的蔬菜之一,但是近年来各种病虫害的发生严重影响了番茄作物的生长、产量及品质。其中,由茄科劳尔氏菌(Ralstonia solanacearum,简称青枯菌)所引发的番茄青枯病的危害最为严重,给农业生产带来巨大的经济损失。青枯病是一种土传病害,土壤中的温度高、湿度大,易引起青枯病的发生。番茄是一种高需肥的作物,其主要从土壤中汲取生长发育所需要的营养物质,在各种肥料中,氮肥的利用最为广泛。氮肥会对作物的产量和品质产生重要的影响,但是过施、偏施也会引起灰霉病、细菌性斑点病等植物病害的发生。目前关于氮肥对于青枯病发生的影响尚不清楚,为此,本文以番茄为实验材料,研究了不同氮肥对番茄青枯病发生的影响,所取得的结果如下:1、番茄青枯菌的鉴定、分离与保存为了得到对番茄具有强致病性的青枯菌菌种,通过培养基筛选出具有致病性的病原菌,接种野生型番茄植株后从茎部提取病原菌作为分离源,并用常规接种检测的方法验证其致病性强弱,将具有强致病性的番茄青枯菌进行分离、保存,用于后续研究。2、根际不同氮肥处理对番茄青枯病发生的影响采用水培的栽培方式,对番茄施用7 mM NO3--N、7 mM Mix-N[NO3--N、NH4+-N(浓度比为7:3),下同]、1 mMNO3--N、1 mM Mix-N的氮肥营养液,番茄叶片中的NO3--N含量和硝酸还原酶(Nitrate reductase,NR)活性依次降低。对番茄植株的根部接种青枯菌R.solanacearum后,7 mM Mix-N处理的番茄植株发病最严重,1mM NO3--N处理的植株发病最轻,表明与7mM相比较,1mM浓度的氮肥可以减轻番茄青枯病的发病情况,同时,在相同浓度条件下,较高的NO3--N含量可以减轻番茄青枯病的发生。番茄根部氮代谢途径起催化作用的关键酶硝酸还原酶(NR)、亚硝酸还原酶(Nitrite reductase,NiR)、谷氨酰胺合成酶(Glutamine synthase,GS)、谷氨酸合成酶(Glutamate synthase,GOG AT)所调控的基因NR、NiR1、NiR2、GS2、Fd-GOGAT的表达量表现出7 mM NO3--N高于7 mM Mix-N高于1 mM NO3--N高于1 mM Mix-N的变化趋势。在接种青枯菌R.solanacearum后,病程相关蛋白路径上的PR基因被诱导上调表达,激素水杨酸(Salicylic acid,SA)、茉莉酸(Jasmonic acid,JA)的含量上升 50%。由此表明,高浓度的氮肥和铵态氮肥会加剧番茄青枯病的发生;根际不同氮肥处理通过影响氮代谢关键酶的活性来影响番茄植株对R.solanacearum的敏感性。3、氮代谢关键基因沉默对番茄青枯病发生的影响利用病毒诱导的基因沉默(Virus-inducedgenesilencing,VIGS)技术构建氮代谢关键基因沉默植株,并接种R.solanacearum后,TRV:NR、TRV:NiR1&2、TRV:GS2、TRV:Fd-GOGAT番茄植株的病情指数与TRV:0相比较下降25%-40%,发病症状减弱;根部抗病相关基因PR1、PR5的表达量显著上调,且在基因沉默植株中的上调倍数显著高于TRV:0植株;接病后植株根部SA、JA的含量也显著上调,且在氮代谢关键基因沉默植株中SA的含量是TRV:0植株的1.5-2.25倍,而JA的含量则少于TRV:0。由此证明,将氮代谢关键基因沉默后,番茄植株对青枯病的抗性提高,并促进抗病激素水杨酸SA的积累,但是其具体的调控机制有待于进一步的深入研究。