近二十年来，鱼类免疫学研究逐渐成为了鱼类预防医学研究的热点，并且取得了很大的进步。目前有关鱼类免疫学的研究多以中枢和外周免疫系统为主，对粘膜免疫系统的研究较少。而鱼类生活在富含病原的“多菌”水环境中，其大面积的粘膜包括表皮、肠和鳃的粘膜构成了抵御病原微生物侵入的第一道防线，因此，对粘膜免疫的深入研究将有利于了解鱼类病原侵入、致病和康复的规律。粘膜免疫球蛋白（mIg）在鱼类粘膜免疫中发挥十分重要的作用，鉴别鱼类mlg与血清免疫球蛋白（Ig）在结构和抗原性上的差异，阐明鱼类mIg的发生与来源，建立鱼类Ig分析与检测方法，并用于监测鱼类的免疫状态，评价疫苗的免疫效果，对于推动鱼类免疫学的发展具有重要的学术价值。本实验以欧洲鳗鲡为模型，提取、纯化了欧洲鳗鲡mIg和血清Ig，并对两者的结构和抗原性进行了比较分析。 1．亲和层析实验 采用饱和硫酸铵盐析法结合单克隆抗体亲和层析法提纯欧洲鳗鲡mIg和血清Ig。柱层析结果表明：样品经Sepharose-4B柱亲和层析分离后出现一个锐形的蛋白峰，蛋白主要分布于收集物的第2-6管，蛋白峰和抗原活性峰重叠；鳗鲡血清Ig峰值管蛋白浓度为1.5046mg·mL^-1，ELISA效价为1：10240；鳗鲡mIg共收集了14管，蛋白总量约为743.6μg，峰值管ELISA效价为1：128。 2．凝胶电泳分析 在变性还原条件下，凝胶电泳结果表明：亲和层析纯化的mIg的蛋白条带总数明显少于硫酸铵沉淀的mIg。其重链和轻链的分子量分别为68kD和26kD，此外，还有一个在分子量约为17kD的蛋白带，它是共洗脱的粘液杂蛋白，还是mIg的固有成分或降解产物需要进一步验证；亲和纯化的鳗鲡血清Ig，其重链分子量约为68kD，轻链有3条，分子量分别为21kD、23kD和26kD。在非变性非还原条件下，凝胶电泳结果显示：纯化的mIg只有一条蛋白带，分子量约为350 kD，略呈扩散拖带现象。这一结果提示自然条件下鳗鲡mIg可能以二聚体形式存在；血清Ig有二个蛋白带分子量约为790kD和350kD，提示鳗鲡血清Ig是以四聚体和二聚体形式存在。在变性非还原条件下，凝胶电泳结果：纯化的欧鳗mIg有三条蛋白带，分子量约为350kD、138kD和135kD，表明欧鳗mIg可能在SDS作用下解聚产生单体；欧鳗血清Ig有三条蛋白带，分子量约为790kD、593kD和350kD，提示欧鳗血清Ig四聚体在SDS作用下可解聚产生三聚体（593kD）。 3．免疫印迹分析