大田软海绵酸（Okadaic acid,OA）是一种聚醚类海洋生物毒素,具有一定的生物毒性,其产生于环境中的赤潮藻类,通过贝类滤食性行为富集后引起一系列环境污染问题并危害水产品安全,因此开展OA毒素快速灵敏检测是环境分析中重要内容之一。本文通过体内诱导制备抗OA腹水并从中纯化出抗OA单克隆抗体,并以此为基础进行了基因工程的制备和表达探索,并建立不同金纳米颗粒标记抗体的酶联免疫分析ELISA方法,实现了对OA海洋毒素的灵敏分析。主要内容包括如下:第一章,绪论。概述了OA性质及其检测技术进展,阐述了不同抗体的特点及其在海洋毒素中的分析应用,提出了论文选题依据和主要研究内容。第二章,抗OA单克隆抗体制备及其性能表征。基于小鼠体内诱导法制备抗OA单克隆抗体（anti-OA-Mc Ab）;开展anti-OA-Mc Ab性能分析,测定抗体亚型、特异性、亲和力等参数。研究表明,抗体效价达到1:128000,结合活性良好抗体亚型为Ig G1,亲和力常数Kaff为1.4×10~9 L/mol,具有高亲和力、高特异性。第三章,基于基因工程技术探索制备抗OA单链抗体和嵌合Ig G抗体。开展了总RNA提取、c DNA合成和抗体VH和VL基因扩增,利用SOE-PCR技术组装制备了抗OA单链抗体sc Fv,并构建了p BD-his6-mbp-linker-OA-sc Fv、p SUMO-linker-OA-sc Fv、p Trx-Tig-linker-OA-sc Fv重组融合表达载体以及p ET28a-SP3-H-linker-OA-VH、p ET28a-SP3-L-linker-OA-VL抗OA嵌合Ig G重组抗体表达载体,进行体外表达后,对抗体蛋白进行了性能表征。研究发现,重组质粒基因测序一致性高,基因工程抗体蛋白溶解性良好,但是存在明显的非特异性吸附。第四章,基于金纳米颗粒标记单克隆抗体的ELISA方法研究及应用。合成了胶体金Au NPs、金纳米花Au NFs、纳米金负载铂复合颗粒Pt@Au NPs,作为抗OA单克隆抗体的载体,构建基于不同金纳米颗粒标记抗体的OA检测ELISA法。结果表明,基于三种金纳米颗粒的ELISA方法检测限分别为0.15 ng/m L、0.076 ng/m L、0.070 ng/m L,比传统ELISA方法灵敏度高5～10倍。以Pt@Au NPs标记抗体对牡蛎、贻贝、花蛤样品进行OA检测分析,在10 ng/m L、5 ng/m L、1 ng/m L浓度下的加标回收率为97.67±2.30%～108.49±8.33%,性能稳定,为ELISA检测OA提供了新的灵敏分析技术。