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目的：粪肠球菌普遍具有形成生物膜的能力，根管内的粪肠球菌主要以生物膜形式存在。粪肠球菌生物膜形成后对抗生素具有更强的抵抗性。乙二胺四乙酸（EDTA）是一种金属螫合剂，EDTA作为常用的根管冲洗液被众多研究者广泛关注。最新研究证明EDTA具有一定的抗菌及抗生物膜的活性，可与多种抗生素联合使用达到协同抗菌和有效清除细菌生物膜的目的[1-5]。洗必泰又称醋酸氯已定，一种广谱抗生素，也是临床上常用的根管冲洗液。本实验研究通过在体外环境下检测EDTA联合洗必泰对粪肠球菌及其生物膜的抗菌效果及清除效果，评价二者是否具有协同抗菌和清除生物膜作用，旨在为临床上更加有效地控制粪肠球菌感染，提高根管治疗成功率提供理论依据。方法：1、采用二倍稀释法分别测定EDTA、洗必泰对粪肠球菌的最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC），然后采用微量棋盘稀释法[6]并通过计算分级抑制浓度指数（FICI）来评价EDTA与洗必泰是否具有协同抗菌的作用。FICI=（MICa联合/MICa单药）+（MICb联合/MICb单药）。FICI≤0.5为协同；FICI>4.0为拮抗；0.5<FICI≤4为相加。2、在96孔板上建立粪肠球菌24h成熟生物膜模型。用BHI培养基把17%EDTA溶液稀释成6种不同浓度并分6组，A1组（1MIC EDTA）、B1组（2MICEDTA）、 C1组（4MIC EDTA）、D1组（8MIC EDTA）、E1组（16MIC EDTA）、F1组（32MIC EDTA），设G1组为阴性对照组，采用MTT法检测各组作用24小时粪肠球菌生物膜后的吸光度值，比较各组之间的差异。不同浓度EDTA联合洗必泰分为6组，A2组（1MIC EDTA+0.002%洗必泰）、B2组（2MICEDTA+0.002%洗必泰）、C2组（4MIC EDTA+0.002%洗必泰）、D2组（8MICEDTA+0.002%洗必泰）、E2组（16MIC EDTA+0.002洗必泰）、F2组（32MICEDTA+0.002洗必泰），设G2组为阳性对照组（BHI培养基+0.002%洗必泰）、H2组为阴性对照组（BHI培养），采用MTT法检测各组作用24小时粪肠球菌生物膜后的吸光度值，比较各组之间的差异。3、在盖玻片上建立粪肠球菌24h成熟生物膜模型，生物膜分别经EDTA、洗必泰或二者联合作用24h后，经荧光染色后置于激光共聚焦显微镜（CLSM）下观察生物膜中细菌染色情况及细菌数量变化。设阴性对照组。结果：1、EDTA的MIC值为5.3125mg/ml。MBC值暂未测到。洗必泰的MIC值为0.00125mg/ml，MBC值为0.005mg/ml。经微量棋盘测定法测的EDTA联合洗必泰的最小抑菌浓度：EDTA（联合）浓度为1.328125mg/ml，洗必泰（联合）浓度为4.88×10－7mg/ml， FICI值为0.250976。2、经药物作用24小时粪肠球菌生物膜后的吸光度值中，A1、B1、C1、D1、E1、F1和G1组7组之间差异无显著性（P>0.05）；联合用药各组（A2组、B2组、C2组、D2组、E2组、F2组）与G2组（阳性对照组）比较差异有显著性（P<0.05），与H2（阴性对照组）比较差异有显著性（P<0.05），而A2、B2、C2、D2、E2、F2各组之间差异无显著性（P>0.05）。3、激光共聚焦显微镜（CLSM）图像显示：EDTA组于CLSM下可见生物膜中细菌密集，镜下视野中菌体染色以绿色荧光为主，仅少量菌体染色为红色荧光，同一视野叠加后，以绿色荧光为主（图10）；洗必泰组于CLSM下可见生物膜中细菌数量减少，镜下视野中菌体染色呈绿色荧光者比例减少，而红色荧光比例增加，图像叠加后呈现黄色或桔色，部分区域为深红色（图11）；EDTA联合洗必泰组，生物膜中细菌数量减少，镜下视野中绝大多数为呈红色荧光染色的菌体，仅有少量绿色荧光菌体呈零星散在分布，图像叠加后绝大多数为红色荧光染色菌体（图12）；阴性对照组可见成熟生物膜细菌密集、层叠，镜下视野中菌体染色以绿色荧光染色者占绝大多数，图像叠加后以绿色荧光为主（图9）。结论：1、EDTA对粪肠球菌具有一定的抑菌作用，而无杀菌作用。2、EDTA联合洗必泰对悬浮状态下的粪肠球菌具有协同抗菌作用。3、EDTA对粪肠球菌生物膜无明显作用。4、EDTA联合洗必泰对粪肠球菌生物膜的作用效果优于洗必泰单独使用，显示二者联合具有较强的抗生物膜作用。