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[目的]探究不同部位脂肪组织对肝细胞胰岛素IRS/PI3K/AKT信号通路关键蛋白的影响及差异。[方法]将人HepG2细胞进行培养,分为:HepG2单独培养组、HepG2+VAT共培养组、HepG2+SAT共培养组、HepG2+TritonX-100处理组,每组2个重复。共培养组采用Transwell小室将收集的内脏脂肪组织(VAT)和皮下脂肪组织(SAT)与HepG2细胞进行体外共培养;以上述方式处理后采用LDH法检测各组培养上清液以判断HepG2细胞的活性。将HepG2单独培养组、HepG2+VAT共培养组及HepG2+SAT共培养组的2个重复,在不含或含胰岛素的培养基中温育10分钟,即分别为:Control 组、Control+insulin 组、VAT 组、VAT+insulin 组、SAT 组、和SAT+insulin组。收集细胞蛋白样品,采用Western blot法检测各组HepG2细胞 IRS2、p-IRS2(S731)、PI3K-p85、Akt2、p-Akt2(S473)蛋白的表达水平。[结果](1)IRS2:①Control组、VAT组及SAT组3组比较,HepG2细胞IRS2蛋白表达水平比较差异有统计学意义,Control组>SAT组>VAT组(P<0.001);②Control+insulin 组、VAT+insulin 组及 SAT+insulin 组 3 组比较,HepG2细胞IRS2蛋白表达水平比较差异有统计学意义,Control+insulin组>SAT+insulin 组>VAT+insulin 组(P<0.05);③与 Control 组相比,Control+insulin组HepG2细胞IRS2蛋白表达水平升高(P<0.05);④与VAT组相比,VAT+insulin组HepG2细胞IRS2蛋白表达水平升高(P<0.05);⑤与SAT组相比,SAT+insulin组HepG2细胞IRS2蛋白表达水平升高(P<0.05)。(2)p-IRS2(S731):①Control 组、VAT 组及 SAT 组 3 组比较,HepG2 细胞 p-IRS2(S731)蛋白表达水平比较差异有统计学意义,Control组<SAT组<VAT组(P<0.05);②与 Control+insulin 组相比,VAT+insulin 组及 SAT+insulin 组HepG2 细胞 p-IRS2(S731)蛋白表达水平均升高(P<0.05);而 VAT+insulin 组与 SAT+insulin组p-IRS2(S731)蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05);③与Control组相比,Control+insulin组HepG2细胞p-IRS2(S731)蛋白表达水平降低(P<0.05);④与VAT组相比,VAT+insulin组HepG2细胞p-IRS2(S731)蛋白表达水平降低(P<0.05);⑤与 SAT 组相比,SAT+insulin 组HepG2 细胞 p-IRS2(S731)蛋白表达水平降低(P<0.05)。(3)PI3K-p85:①Control组、VAT组及SAT组3组比较,HepG2细胞PI3K-p85蛋白表达水平比较差异有统计学意义,Control组>SAT 组>VAT 组(P<0.001);②Control+insulin 组、VAT+insulin 组及SAT+insulin组3组比较,HepG2细胞PI3K-p85蛋白表达水平比较差异有统计学意义,Control+insulin 组>SAT+insulin组>VAT+insulin 组(P<0.001);③与Control组相比,Control+insulin组HepG2细胞PI3K-p85蛋白表达水平升高(P<0.001);④与 VAT 组相比,VAT+insulin 组 HepG2 细胞 PI3K-p85 蛋白表达水平升高(P<0.05);⑤与SAT组相比,SAT+insulin组HepG2细胞PI3K-p85蛋白表达水平升高(P<0.05)。(4)Akt2:①Control组、VAT组及SAT组3组比较,HepG2细胞Akt2蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05);②Control+insulin 组、VAT+insulin 组及 SAT+insulin 组 3 组比较,HepG2 细胞Akt2蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05);③Control组与Control+insulin组相比,HepG2细胞Akt2蛋白表达水平无统计学差异(P>0.05);④VAT组与VAT+insulin组相比,HepG2细胞Akt2蛋白表达水平无统计学差异(P>0.05);⑤SAT组与SAT+insulin组相比,HepG2细胞Akt2蛋白表达水平无统计学差异(P>0.05)。(5)p-Akt2(S473):①Control 组、VAT 组及 SAT组3组比较,HepG2细胞p-Akt2(S473)蛋白表达水平比较差异有统计学意义,Control 组>SAT组>VAT 组(P<0.001);②Control+insulin 组、VAT+insulin组及SAT+insulin组3组比较,HepG2细胞p-Akt2(S473)蛋白表达水平比较差异有统计学意义,Control+insulin 组>SAT+insulin 组>VAT+insulin组(P<0.05);③与 Control 组相比,Control+insulin 组 HepG2 细胞 p-Akt2(S473)蛋白表达水平升高(P<0.05);④与VAT组相比,VAT+insulin组HepG2细胞p-Akt2(S473)蛋白表达水平升高(P<0.05);⑤与SAT组相比,SAT+insulin组HepG2细胞p-Akt2(S473)蛋白表达水平升高(P<0.05)。(6)与Control组相比,VAT组 HepG2 细胞 IRS2、p-IRS2(S731)、PI3K-p85、Akt2、p-Akt2(S473)蛋白表达变化程度差异有统计学意义,即p-IRS2(S731)蛋白表达变化程度较IRS2、PI3K-p85、p-Akt2(S473)蛋白大,Akt2 蛋白表达变化程度较 IRS2、PI3K-p85、p-Akt2(S473)蛋白小(P<0.05)。(7)与 Control 组相比,SAT 组 HepG2 细胞IRS2、p-IRS2(S731)、PI3K-p85、Akt2、p-Akt2(S473)蛋白变化程度差异有统计学意义,即p-IRS2(S731)蛋白表达变化程度较IRS2、PI3K-p85、p-Akt2(S473)大,Akt2 蛋白表达变化程度较 IRS2、PI3K-p85、p-Akt2(S473)小(P<0.05)。(8)与 Control+insulin 组相比,VAT+insulin 组 HepG2 细胞 IRS2、p-IRS2(S731)、PI3K-p85、Akt2、p-Akt2(S473)蛋白表达变化程度差异有统计学意义,即p-IRS2(S731)蛋白表达变化程度较IRS2、PI3K-p85、p-Akt2(S473)大,Akt2 蛋白表达变化程度较 IRS2、PI3K-p85、p-Akt2(S473)小(P<0.05)。(9)Control+insulin组相比,SAT+insulin组HepG2细胞 IRS2、p-IRS2(S731)、PI3K-p85、Akt2、p-Akt2(S473)蛋白表达水平变化程度差异有统计学意义,即p-IRS2(S731)蛋白表达变化程度较 IRS2、PI3K-p85、p-Akt2(S473)大,Akt2蛋白表达变化程度较 IRS2、PI3K-p85、p-Akt2(S473)小(P<0.05)。[结论](1)与VAT或SAT共培养后,HepG2细胞IRS2、PI3K-p85、p-Akt2(S473)蛋白表达水平均降低,p-IRS2(S731)蛋白表达水平均升高,提示VAT与SAT均能影响肝细胞胰岛素信号传导。(2)与SAT共培养的HepG2细胞相比,与VAT 共培养的 HepG2 细胞 IRS2、p-IRS2(S731)、PI3K-p85、p-Akt2(S473)蛋白表达水平变化更明显,提示不同部位脂肪组织对肝细胞胰岛素敏感性存在差异性影响,VAT对肝细胞胰岛素抵抗的影响较SAT更明显。(3)与VAT或SAT共培养后,HepG2细胞p-IRS2(S731)蛋白表达水平变化最明显,提示p-IRS2(S731)蛋白是VAT和SAT介导的肝细胞胰岛素抵抗的主要参与者。(4)与VAT或SAT共培养后,HepG2细胞Akt2蛋白表达水平无变化,未提示Akt2蛋白参与VAT和SAT介导的肝细胞胰岛素抵抗。