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背景:红细胞输注已经成为临床上挽救患者生命的一个重要手段,输注的效果与红细胞保存质量密切相关。如何进一步提高红细胞的保存质量和输注效果是输血医学的永恒话题。国际最新临床研究结果表明,输注库血严重恶化临床预后;给库血补充一氧化氮(nitricoxide,NO)可以明显改善红细胞的变形性及输注后效果。在机体内每天都有大量新生和凋亡的红细胞,但是在离体环境下(如血液保存时),细胞功能逐渐下降,最先发生功能丧失并崩解破裂的应该是那些衰老的老年红细胞,年轻红细胞因为有着较强的生命活力可以保存较长时间。所以,提高红细胞保存质量的关键是如何提高老年红细胞保存质量。
目的:本研究拟从血液中分离容易破坏的老年红细胞,同时以年轻红细胞作为对照,补充适量NO后,考察NO对红细胞体外保存的影响效果。
方法:①根据密度梯度离心法分离细胞的原理,将红细胞按照平均密度大小进行分离,分别检测与红细胞老化相关的各种指标,包括丙酮酸激酶活性、细胞天龄、ATP含量、红细胞变形性、细胞显微形态。②对新鲜红细胞悬液实行体外除氧保存,检测相关生理生化指标;并对同一份血液分离出的年轻红细胞和老年红细胞膜带3蛋白及除氧保存组与对照组红细胞膜带3蛋白进行检测。③在新鲜血液中分别介入NO气体盐溶液及NO供体硝普钠(SodiumNitroprusside,SNP)盐溶液,在保存过程的不同时间点检测未分离及不同密度红细胞功能,并与对照组相比较。
结果:①红细胞老化相关指标与密度都有很好的相关性,证明了依据细胞密度分离年轻及老年红细胞的可行性。②老年红细胞膜带3蛋白发生聚簇,除氧可以延缓红细胞体外老化并显著减少带3蛋白的聚簇化。③在一定的NO浓度下,NO对未分离红细胞的各项指标(包括游离血红蛋白FHb、pH、血浆K+、红细胞变形性)无显著性影响作用(P>0.05),但是胞内ATP含量略有升高;但NO显著改善老年红细胞的变形性(P<0.05),对年轻红细胞的变形性没有影响(P>0.05),另外年轻及老年红细胞内ATP含量都有所升高。
结论:氧化损伤可能是红细胞老化的关键,其中带3蛋白聚簇化是分子机制;NO在一定浓度下可显著改善老年红细胞变形能力,机制可能是NO对功能已经下降的老年红细胞的选择性作用,值得进一步研究。