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研究背景卵巢癌是一种常见的妇科恶性肿瘤,其死亡率在妇科恶性肿瘤中居于首位。骨形态发生蛋白(Bone morphogenetic proteins,BMPs)是转化生长因子β超家族的成员,广泛参与细胞增殖、分化和凋亡等生物学过程。BMP7能够与细胞膜上的受体相结合,通过膜受体介导的R-Smad蛋白Smad1/5/9被磷酸化激活而调节多个目的基因。研究证实BMP7在卵巢癌耐药组织和细胞中表达增高,但BMP7在卵巢癌中的表达和对卵巢癌细胞生物学行为的影响尚不清楚。该研究旨在探索BMP7在卵巢癌组织和正常卵巢组织中的表达和下调BMP7对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭、细胞周期及紫杉醇敏感性的影响和卵巢癌细胞中R-Smad和ID2表达水平的变化。材料和方法收集55例卵巢癌组织和40例正常卵巢组织,利用免疫组织化学技术检测两种组织中BMP7蛋白的表达。体外培养卵巢癌A2780细胞,通过慢病毒转染下调BMP7的表达,将其分为阴性对照组(sh-NC组)和BMP7下调组(sh-BMP7组)。利用荧光显微镜观察表达绿色荧光蛋白的细胞的比例,通过RT-qPCR检测细胞中BMP7和ID2的mRNA水平。Western blotting检测细胞中Smad1/5/9、p-Smad1/5/9、ID2、cyclinD1 及上皮-间质转化相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Slug和Snail)的表达水平。通过细胞免疫荧光技术检测细胞中BMP7和p-Smad1/5/9蛋白的表达水平。CCK-8增殖实验和克隆形成实验观察下调BMP7对A2780细胞增殖影响。Transwell实验检测下调BMP7对A2780细胞迁移和侵袭能力的影响。利用流式细胞术检测下调BMP7对A2780细胞周期的影响。CCK-8毒性试验和流式细胞术检测下调BMP7后A2780细胞对紫杉醇敏感性的改变。结果1.BMP7在卵巢癌和正常卵巢组织中的表达BMP7的阳性染色主要位于细胞浆和细胞外基质中。与正常卵巢组织相比,BMP7在卵巢癌组织中阳性表达率明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。2.慢病毒转染效率的检测慢病毒转染的细胞可表达绿色荧光蛋白,荧光显微镜观察显示表达绿色荧光蛋白的细胞占比在95%以上。RT-qPCR检测显示sh-BMP7组BMP7 mRNA的表达较 sh-NC 组下降(P<0.05)。Western blotting 结果显示 sh-BMP7 组 BMP7 蛋白的表达较sh-NC组下降。免疫荧光结果显示sh-BMP7组BMP7蛋白表达下降。3.下调BMP7抑制卵巢癌细胞的增殖CCK-8增殖实验结果显示,sh-BMP7组细胞的增殖速度较sh-NC组减慢(P<0.05)。克隆形成实验结果显示,sh-BMP7组的细胞克隆数较sh-NC组减少(P<0.05)。4.下调BMP7导致卵巢癌细胞发生细胞周期阻滞流式细胞术结果显示,G1期的细胞比例sh-BMP7组较sh-NC组增高(P<0.05),而S期的细胞比例sh-BMP7组较sh-NC细胞下降(P<0.05)。Western blotting结果显示,sh-BMP7组cyclinD1的表达较sh-NC组下降。5.下调BMP7抑制卵巢癌细胞的迁移和侵袭及逆转上皮-间质转化Transwell实验结果显示,sh-BMP7组细胞的迁移和侵袭能力较sh-NC组降低。Western blotting结果显示,sh-BMP7组中E-cadherin蛋白的表达上调,而N-cadherin和Vimentin蛋白的表达下调,且Snail和Slug蛋白的表达也下调。6.下调BMP7增强卵巢痛细胞对紫杉酵的敏感性CCK-8毒性试验结果显示,不同浓度紫杉醇处理细胞24h,相同浓度下sh-BMP7组的细胞相对存活率较sh-NC组降低(P<0.05)。流式细胞术结果显示,2μM紫杉醇处理细胞24h,sh-BMP7组细胞的早期凋亡率高于sh-NC组(P<0.05)。7.下调 BMP7 导致 Smad1/5/9、p-Smad1/5/9 和 ID2 表达下降Western blotting 结果显示 sh-BMP7 组 Smad1/5/9、p-Smad1/5/9 和 ID2 蛋白的表达下降;RT-qPCR结果显示sh-BMP7组ID2 mRNA的表达较sh-NC组下降(P<0.05);免疫荧光结果显示sh-BMP7组p-Smad1/5/9蛋白表达下降。结论BMP7在卵巢癌组织中表达增加。下调BMP7能够抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭,逆转上皮-间质转化,导致周期阻滞及增强对紫杉醇的敏感性。BMP7可能通过BMP7/Smad1/5/9通路在卵巢癌细胞中发挥作用。BMP7可能是提高卵巢癌治疗效率的潜在靶点。