雅致放射毛霉转化腺嘌呤合成ATP的研究

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ATP是生物细胞生命活动能量的直接来源,临床上广泛用作细胞激活剂,对肝炎、心脏病、肌肉萎缩、脑溢血后遗症等有良好疗效,近期ATP促进细胞坏死和凋亡、抗癌等作用受到关注,有望成为抗癌辅助药物。本论文对毛霉菌转化腺嘌呤合成ATP进行了系统研究,包括响应面法优化毛霉菌培养条件及培养基、腺嘌呤合成ATP的初始反应体系的研究、菌体通透性的系统研究及补料反应体系初探。通过单因素试验得到毛霉菌最适培养温度为28℃,最佳摇床转速为160r/min,最佳培养时间为12h。通过单因素试验、Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验及Box-Behnken试验确定了毛霉菌的最适培养基(g/L):葡萄糖51.54,酵母膏5.22,玉米浆14.31,MgSO4·7H2O0.5,FeSO4·7H2O0.1,NH4Cl3,K2HPO4·3H2O3,pH6.0~6.5。毛霉生物量、腺嘌呤转化率、ATP产量分别由优化前的23.51g/L、53.59%、6.56g/L提高至31.13g/L、59.97%、7.34g/L,分别提高32.41%、11.89%、11.89%。综合研究腺嘌呤合成ATP的初始反应体系,设计正交试验优化反应液配方,工艺改进后,在含有3g/L腺嘌呤的反应液中,经33℃转化反应12h, ATP产量达到8.51g/L,腺嘌呤转化率达到69.53%,与工艺改进前相比,提高了41.83%。利用物理方法、化学方法处理毛霉菌体,筛选出干燥方法并进行优化研究,采用电导率法验证干燥方法提高了毛霉菌细胞膜的通透性、腺嘌呤转化率及ATP产量。工艺优化后,ATP产量提高至10.13g/L,腺嘌呤转化率为82.76%,比对照组提高202.39%。通过单因素试验得出反应过程中最适pH为6.5,采用菲林试剂法测得葡萄糖最适浓度为40g/L,采用磷钒钼黄比色法测定Na2HPO4·12H2O浓度,建立磷标准曲线,得到Na2HPO4·12H2O最适浓度为20g/L,采用EDTA络合滴定法测得MgCl2·6H2O的最适浓度为3g/L。初步探索了毛霉菌转化腺嘌呤合成ATP的补料反应体系,结果表明:当腺嘌呤用量为8g/L时,腺嘌呤转化率为56.07%,ATP产量达到18.33g/L,比工艺优化前提高了179.42%。
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