羊肚菌培养条件优化及其多糖生物活性的研究

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本论文通过对羊肚菌(morchella esculenta 5.0381)的优化培养,提取胞外多糖,经纯化检验后,对其生物活性进行研究。首先通过正交实验设计考察了氮源含量、碳源含量、接种量、初始pH对粗多糖得率和生物量的影响,确定最佳培养条件为:麸皮5%、蔗糖4%、接种量2%,初始pH6。将发酵液浓缩醇沉得胞外多糖MEP,其含糖量约为32.7%,蛋白含量约为39.2%。对所提胞外粗多糖MEP进行体内活性实验,研究羊肚菌粗多糖对四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤的保护作用。预防给药16天后,采用CCl4复制小鼠急性肝损伤模型,24小时后,眼眶取血,测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)以及血清蛋白的变化,观察羊肚菌粗多糖对急性肝损伤的保护作用。结果表明羊肚菌粗多糖能明显降低模型组的血清转氨酶、肝脂质过氧化物含量抑制蛋白流失及肝脏肿大。羊肚菌粗多糖对小鼠肝脏的化学损伤有显著的保护作用。进一步将MEP过DEAE-Sepharose F.F色谱柱进行纯化,得到羊肚菌多糖MEP-Ⅰ。经检测MEP-Ⅰ多糖含量89.12%,蛋白含量7.64%。对MEP-Ⅰ进行体内抗S180肿瘤活性试验。通过检测荷瘤鼠的瘤块和免疫器官质量,存活时间等发现羊肚菌多糖具有很好的体内抗肿瘤活性。在200~400mg/kg剂量范围内最高抑瘤率可达64.42%,抑瘤效果接近阳性对照环磷酰氨组(66.35%)且可增强机体的免疫功能。MEP-Ⅰ还可以明显延长腹水瘤小鼠的存活时间。在体外试验中,发现羊肚菌多糖MEP-Ⅰ具有直接杀死S180肿瘤细胞的作用,最高抑制率为46.3%。羊肚菌多糖MEP-Ⅰ再经过快速纯化系统(AKTA Purifier10)收集含糖组分得到MEP-Ⅱ。体外实验表明MEP-Ⅱ仍具有直接杀死S180肿瘤细胞的作用,但抑制率最高抑制仅为18.4%。
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