【摘 要】
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体外成熟的卵母细胞是体外受精、核移植、转基因动物等动物胚胎工程技术研究的基本试验材料。虽然水牛卵母细胞体外成熟培养的研究已经取得了很大的进展,但体外成熟卵母细胞
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体外成熟的卵母细胞是体外受精、核移植、转基因动物等动物胚胎工程技术研究的基本试验材料。虽然水牛卵母细胞体外成熟培养的研究已经取得了很大的进展,但体外成熟卵母细胞质量仍然不如体内成熟的卵母细胞,卵母细胞成熟过程中的基因表达变化规律尚缺乏了解。本研究拟对水牛卵母细胞体外成熟前后差异表达的基因进行研究,以便深入了解水牛卵母细胞成熟的分子机制,为完善水牛卵母细胞体外成熟培养系统提供依据。选用三条锚定引物和八条随机引物,通过mRNA差异显示技术(differentialdisplay reverse transcription polymerase chain reaction,DDRT-PCR)对水牛卵母细胞成熟前后差异表达的基因进行PCR扩增,经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离比较后得到28条差异表达的条带,对其中的9条成功进行了重扩增和克隆测序。结果发现,有6条片段分别比对上牛的RPL31(ribosomal protein L31)基因,LIMHOX(LIM-homeodomain protein)基因,CAF1A(chromatinassembly factor 1,subunitA)基因,eIF4(eukaryotic translation initiation factor 4gamma)基因,RHOBTB2(Rho-related BTB domain containing 2)基因和cep350(centrosome-associated protein 350,transcript variant 1)基因,其中RPL31基因,cep350基因在成熟前表达,成熟后消失,LIMHOX,CAF1A,eIF4,RHOBTB2在成熟后表达,成熟前不表达。片段A4在GenBank上未发现相似性序列,可能为新基因。
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