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目的:探讨富含半胱氨酸运动神经元蛋白1(CRIM1)表达与子宫颈鳞癌微血管生成的关系及其分子机制。方法:1、免疫组化检测子宫颈鳞癌组织及慢性宫颈炎组织中CRIM1的蛋白表达,采用内皮CD34标记结合Weinner计数检测癌组织的微血管密度(MVD),分析CRIM1的表达与MVD之间的关系。2、pCMV3-CRIM1质粒瞬时转染SiHa细胞,Western blot鉴定转染效率,以获得CRIM1基因过表达,随后Western blot检测VEGF(血管内皮生长因子)表达,ELISA检测上清中VEGF表达变化;取上述分组的上清液作用人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分别利用CCK8实验、Transwell迁移实验、管腔形成实验检测CRIM1对宫颈鳞癌血管诱生能力的影响。3、SiHa细胞CRIM1基因瞬时转染36小时后,用p-ERK抑制剂U0126处理转染细胞,Western blot检测CRIM1、ERK、p-ERK、VEGF蛋白表达水平的变化,以初步阐明CRIM1上调VEGF的信号机制;通过CCK8实验、Transwell迁移实验和管腔形成实验观察癌细胞ERK激活被抑制情况下对HUVECs增殖能力、迁移能力和管腔形成能力的影响,从而进一步明确ERK-VEGF信号通路在CRIM1促进宫颈鳞癌细胞血管诱生能力中的作用。4、利用p-FAK抑制剂Y15作用于CRIM1转染后的SiHa细胞,Western blot检测CRIM1、FAK、p-FAK、ERK、p-ERK、VEGF蛋白表达水平的变化,观察CRIM1是否通过活化FAK激活下游ERK调节VEGF的表达,从而明确CRIM1促进宫颈鳞癌血管诱生能力的分子机制。5、人重组CRIM1蛋白直接刺激宫颈鳞癌SiHa细胞,Western blot、ELISA法检测蛋白及上清中VEGF表达变化,从而观察CRIM1是否可作为外分泌性蛋白影响宫颈鳞癌细胞的血管诱生能力。结果:1、CRIM1在宫颈鳞癌组织中的表达水平显著高于其在慢性宫颈炎组织中的表达水平,二者差异具有统计学意义(t=5.349,P<0.001);相关性分析显示CRIM1的表达与宫颈鳞癌微血管密度正相关(P<0.01,r=0.546)。2、pCMV3-CRIM1质粒瞬时转染SiHa细胞后,Western blot结果显示,阳性转染组CRIM1的表达水平(0.819±0.086)和VEGF的表达水平(0.404±0.039)分别显著高于control组(0.092±0.021、0.059±0.008)(t=11.609,P<0.001;t=12.077,P<0.001)和vector转染组(0.122±0.019、0.056±0.008)(t=11.167,P<0.001;t=10.636,P<0.001),相应地,ELISA结果显示,阳性转染组细胞上清液中VEGF含量为(763.751±25.816pg/ml),也显著高于control组(653.501±25.487pg/ml)(t=5.264,P<0.01)和vector组(649.006±36.539pg/ml)(t=4.113,P<0.01),且转染组癌细胞上清液刺激下的HUVECs的增殖能力、迁移能力和管腔形成能力都明显高于control组(t=4.107,P<0.01;t=4.566,P<0.05;t=2.915,P<0.05)和vector转染组(t=4.28,P<0.01;t=5.013,P<0.05;t=2.4,P<0.05)。3、U0126处理转染细胞后Western blot结果显示,U0126+pCMV3-CRIM1联合处理组CRIM1蛋白水平与pCMV3-CRIM1转染组CRIM1蛋白水平相比没有显著性差异(t=1.631,P>0.05),但p-ERK、VEGF蛋白表达水平(0.218±0.008、0.061±0.008)显著低于pCMV3-CRIM1转染组蛋白表达水平(0.416±0.016、0.244±0.014)(t=18.973,P<0.001;t=19.011,P<0.001);加上上述分组中的癌细胞上清液对照组3组癌细胞上清液刺激HUVECs分别命名为:control组,pCMV3-CRIM1组,pCMV3-CRIM1+U0126组,实验结果显示,pCMV3-CRIM1组与control组比较,HUVECs的增殖能力增强(t=8.749,P<0.001)、迁移能力增强(t=4.745,P<0.01),管腔形成能力增强(t=8.5,P<0.05),U0126+pCMV3-CRIM1联合处理组对比pCMV3-CRIM1组其HUVECs的增殖能力明显减弱(t=8.198,P<0.001)、迁移能力减弱(t=2.786,P<0.05)、管腔形成能力减弱(t=9.827,P<0.001)。4、pCMV3-CRIM1转染组CRIM1、p-FAK、p-ERK和VEGF蛋白表达水平分别为(0.315±0.016、1.462±0.278、0.416±0.057、0.135±0.022),对比control组各蛋白表达水平(0.162±0.030、0.294±0.169、0.124±0.016、0.086±0.010)明显增强(t=7.833,P<0.01;t=6.203,P<0.001;t=8.475,P<0.01;t=3.423,P<0.05),但与pCMV3-CRIM1转染组相比,Y15+pCMV3-CRIM1联合处理组p-FAK、p-ERK蛋白表达水平(0.951±0.054、0.291±0.041)减弱(t=3.119,P<0.05;t=3.068,P<0.05),相应地,VEGF蛋白(0.060±0.006)也明显减弱(t=5.564,P<0.01),而CRIM1蛋白表达水平无显著变化(t=1.124,P>0.05)。5、人重组蛋白CRIM1直接作用于宫颈鳞癌SiHa细胞,VEGF蛋白表达及上清中VEGF含量无明显变化(P>0.05)。结论:1、CRIM1在宫颈鳞癌组织中高表达,其表达与宫颈鳞癌微血管密度(MVD)呈正相关。2、内源性CRIM1的高表达促进宫颈鳞癌微血管生成,其分子机制可能与CRIM1激活癌细胞FAK-ERK1/2信号途径上调VEGF表达有关。3、CRIM1不能作为外分泌性蛋白影响宫颈鳞癌细胞的血管诱生能力。