研究目的1、研究富血小板血浆（PRP）结合周期性机械牵拉对C2C12成肌细胞分化以及对C2C12肌管萎缩的影响;2、进一步探究PRP结合周期性机械牵拉产生的治疗作用对于C2C12细胞肌管萎缩的相关分子机制,为今后临床治疗肌肉萎缩提供新思路。研究方法在分化实验中,首先验证PRP促进细胞分化的最适浓度。实验分为空白对照组（CON组）和不同浓度PRP干预组（即1%PRP、2%PRP、4%PRP）,干预结束后提取蛋白样本,通过蛋白质印记（Western blot,WB）法分别检测各组分化标志蛋白Myo D、Myo G和凋亡自噬相关蛋白Bax、Bcl2、Beclin-1的含量表达变化;在选取最适浓度PRP后,探究PRP、周期性机械牵拉（Str）分别干预及共同干预对C2C12细胞的促分化作用;为进一步验证其发挥作用相关分子机制,实验分为CON组、2%PRP+Str组、2%PRP+Str+Akt抑制剂（GDC0068）组,干预结束后通过WB法检测分化相关蛋白Myo D、Myo G及参与蛋白合成分解的信号通路关键蛋白Akt、p-Akt、p70、p-p70的表达水平变化。在抗萎缩实验中,使用TNF-α诱导出C2C12骨骼肌细胞萎缩模型,使用2%PRP处理细胞以明确其改善萎缩的情况。实验分为CON组、TNF-α组、TNF-α+2%PRP组,干预结束后使用改良吉姆萨染色观察C2C12细胞肌管直径变化,以验证细胞萎缩模型建立成功及2%PRP的抗萎缩作用;其次,探究最适浓度PRP及PRP结合周期性机械牵拉对于改善C2C12骨骼肌细胞萎缩的作用,实验分为CON组、TNF-α组、TNF-α+2%PRP组、TNF-α+2%PRP+Str组,通过WB检测萎缩相关蛋白Mu RF-1、Fbx32的含量表达变化;为进一步验证其发挥作用的相关分子机制,实验分组为CON组、TNF-α组、TNF-α+PRP+Str组、TNF-α+PRP+Str+Akt抑制剂（GDC0068）组,干预结束后通过WB法检测Mu RF-1、Fbx32及参与蛋白合成分解的信号通路关键蛋白Akt、p-Akt、p70、p-p70的表达水平变化。研究结果1.PRP促分化实验中,与空白对照组相比,2%PRP组细胞分化标志蛋白Myo D、Myo G表达含量明显增加;且实验结果显示更高浓度4%PRP干预组分化蛋白表达含量较2%PRP组下降,高浓度PRP反而抑制细胞分化;与空白对照组相比,2%PRP组自噬相关蛋白Beclin-1和凋亡相关蛋白Bcl-2表达含量明显增加,Bax含量明显下降。故选取2%PRP为最适浓度进行后续实验研究;2.PRP结合周期性机械牵拉实验中,与CON组相比,2%PRP组、Str组、2%PRP+Str组分化标志蛋白Myo D、Myo G表达含量均有所增加,但2%PRP+Str组差异更加显著;且Akt、p-Akt、p70、p-p70的蛋白表达水平均被上调;在使用Akt通路抑制剂GDC0068后,促分化作用被抑制;3.在抗萎缩实验中,基于分化实验选取的2%PRP浓度干预TNF-α诱导的C2C12细胞萎缩模型。改良吉姆萨染色结果显示,与CON组相比,TNF-α组肌管明显萎缩,TNF-α+2%PRP组可有效改善肌管萎缩现象,增加萎缩肌管的横截面积;4.PRP结合周期性机械牵拉改善肌管萎缩实验中,与TNF-α组相比,TNF-α+2%PRP组和TNF-α+2%PRP+Str组萎缩相关蛋白Mu RF-1、Fbx32表达含量均下降,具有统计学意义,但TNF-α+2%PRP+Str组较TNF-α+2%PRP组下降趋势更明显;在使用Akt抑制剂GDC0068干预后,可下调Akt、p-Akt、p70、p-p70的蛋白表达水平,PRP结合周期性机械牵拉的抗萎缩作用被抑制;研究结论研究表明,2%PRP结合周期性机械牵拉可有效促进C2C12成肌细胞分化,改善TNF-α诱导的肌肉萎缩,并通过Akt/p70信号通路发挥作用。