【摘 要】
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凝胶过滤介质在蛋白质、多糖等生物大分子的分离纯化过程中具有非常重要的作用,其中介质的孔径分布是决定分离纯化效果的关键因素。由于绝大部分凝胶过滤介质是软凝胶,因此很难
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凝胶过滤介质在蛋白质、多糖等生物大分子的分离纯化过程中具有非常重要的作用,其中介质的孔径分布是决定分离纯化效果的关键因素。由于绝大部分凝胶过滤介质是软凝胶,因此很难用常规的方法如压汞法、低温氮吸附法等测定其孔径分布。本文主要探索了利用低场核磁共振测定凝胶过滤介质的孔径分布的方法。首先在不同温度下测定介质的横向弛豫时间(transversal relaxation time, T2),确定了介质测定的最适宜温度为32±0.01℃。通过抽滤、自制琼脂糖凝胶块、介质烘干等实验确定了T2上峰的归属问题,明确了介质孔内水、介质间隙水和自由水在核磁共振T2图谱上的分布范围,孔内水出峰时间约在10ms左右,介质间隙水出峰在100ms左右,而自由水出峰在2400ms左右处。明确了峰的归属之后,我们随后与文献中报道的逆体积排阻层析法(inversedsize-exclusion chromatography, ISEC)测定的结果相比较,进而得出层析介质孔径和介质孔内水弛豫时间的关系;紧接着通过高斯正态拟合得到了介质的孔径分布。与ISEC数据的对比结果同时证实了低场核磁共振法测定蛋白层析介质孔径的可行性。低场核磁法具有操作简单、测定迅速,不损坏样品等优点,我们能从弛豫时间与孔径之间的关系拟合得到孔径分布,进而为蛋白层析过程提供理论指导。低场核磁能够直观的展现不同介质孔径的变化情况,我们利用低场核磁定性分析了几种不同处理方式介质的孔径变化。实验结果表明,低场核磁是测定蛋白层析介质的一种简单快捷的方法。
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