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本试验就国内近些年来引进的波尔山羊进行了精子体外获能和体外受精的研究,利用去透明带仓鼠卵穿透试验和台盼蓝-姬姆萨双重顶体染色(TG)技术检测了精子的死活和获能效果,同时将获能的精子与体外培养成熟的屠宰山羊卵母细胞和超排山羊卵母细胞进行了体外受精试验。 在获能液中孵育2~3h后,部分精子呈超激活运动方式,表现为激烈的穿梭运动和“鞭打样”运动。由此可以初步确认精子开始或已经获能。 精子用离心法和上游法处理后的顶体反应率和活力表明,上游法更有利于波尔山羊精子的处理。洗涤后的精子放入含有20μg/ml肝素的T液(含6mg/mlBSA+10mmol/L HEPES)、B液(含2mg/ml BSA+5mmol/L HEPES)、D液(无BSA和HEPES)三种培养液中进行获能处理,结果表明T液处理波尔山羊精子的效果明显优于B液和D液,精子孵育4~6h的顶体反应率T组极显著高于D、B组(P<0.01)。从培养液对精子的保护效果来看,培养6h后,T组活力下降缓慢,优于D、B组。无论那种培养液,精子获能4h和6h的效果优于4h以前的获能效果,差异极显著(P<0.01),而这两个时间段之间差异不显著(P>0.05)。 无论是从顶体反应率还是从穿透率上看,肝素的添加剂量以20μg/ml和50μg/ml的效果较好,与20μg/ml以下肝素组的效果相比差异极显著(P<0.01),这两个水平之间效果差异不显著(P>0.05)。钙离子载体的添加剂量以0.3μmol/L为宜,顶体反应率和去透明带仓鼠穿透率均高于其它剂量组。咖啡因与肝素、钙离子载体具有协同作用,尤其与钙离子载体的协同作用更加明显,去透明带仓鼠卵穿透率达到78.3%。 无论是肝素还是钙离子载体,获能精子与去透明带仓鼠卵孵育4h和6h的穿透率均高于2h时的穿透率。经肝素诱导的获能精子与山羊成熟卵母细胞进行体外受精的适宜时间为17h,时间短时精卵未完全结合,时间长则对受精卵的进一步发育不利。超排山羊卵母细胞的受精率略高于体外培养成熟的屠宰山羊卵母细胞。 山羊的冻精比较脆弱,获能后活力急剧下降。从顶体反应率来看,鲜精的获能效果明显优于冻精,二者差异极显著(P<0.01)。