【摘 要】
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目的:阐明胆固醇主要代谢产物27羟基胆固醇(27-OHC)对肺癌细胞增殖/凋亡的影响,进一步探讨其机制。方法:经文献查阅与预实验摸索,分别采用0-10μM的27-OHC处理人肺腺癌细胞株A549及人大细胞肺癌细胞H460 24-48 h,随后使用细胞计数试剂盒CCK-8评估细胞活力,在0-5μM的27-OHC处理浓度条件下,进一步采用流式细胞术检测A549细胞周期及凋亡,TUNEL细胞凋亡原位检测
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目的:阐明胆固醇主要代谢产物27羟基胆固醇(27-OHC)对肺癌细胞增殖/凋亡的影响,进一步探讨其机制。方法:经文献查阅与预实验摸索,分别采用0-10μM的27-OHC处理人肺腺癌细胞株A549及人大细胞肺癌细胞H460 24-48 h,随后使用细胞计数试剂盒CCK-8评估细胞活力,在0-5μM的27-OHC处理浓度条件下,进一步采用流式细胞术检测A549细胞周期及凋亡,TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒检测A549细胞凋亡,EdU增殖实验检测A549细胞增殖情况,组织总胆固醇检测试剂盒检测A549细胞内总胆固醇水平,荧光定量PCR及Western blotting分别检测A549细胞中三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1),3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMG-CR)和低密度脂蛋白受体(LDLR)基因/蛋白表达情况,采用5μM的肝X受体(LXRs)通路抑制剂GSK2033再次处理A549细胞,CCK-8评估其对细胞活力的影响结果:27-OHC以剂量依赖性方式显著降低了A549肺癌细胞的活力(P<0.01),抑制了细胞增殖(P<0.05)。27-OHC通过上调LXRs信号通路下游靶蛋白/基因ABCA1的表达,促进细胞内胆固醇的外排,同时下调HMG-CR和LDLR的表达,减少胆固醇的从头合成和摄入,最终导致细胞内胆固醇水平降低,细胞活力下降。此外,LXRs通路被5μM GSK2033部分阻断后,27-OHC对A549细胞活力的抑制作用显著减弱(P<0.05)。但流式细胞术及TUNEL细胞凋亡原位检测实验均未观察到27-OHC对A549细胞凋亡的显著影响。结论:27-OHC通过激活LXRs通路抑制A549细胞增殖。
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