论文部分内容阅读
目的:通过基因芯片筛查膀胱癌组织及癌旁正常组织中lnc RNA及m RNA的差异表达,发现与膀胱癌发病相关的lnc RNA及m RNA,分析差异表达基因的生物学功能;对筛选到的差异表达基因lnc RNA-n336928及SPP1在大样本的膀胱癌患者组织中进行验证,并分析其与膀胱癌患者临床病理相关指标及预后的相关性;体外实验明确lnc RNA-n336928在膀胱癌发生进展中的作用,并探讨相关的分子机制方法:采用基因芯片的方法检测3例膀胱癌组织及对应的癌旁正常组织中lnc RNA与m RNA的表达情况,并对芯片结果进行统计学分析,确定膀胱癌组织及癌旁正常组织lnc RNA与m RNA的差异表达谱,并采用q RT-PCR的方法进行验证,对差异表达基因进行富集分析及GO分析,预测差异表达基因的生物学功能;在95例膀胱癌组织及癌旁正常组织中采用q RT-PCR的方法检测lnc RNA-n336928及SPP1 m RNA的差异表达情况,通过卡方检验分析lnc RNA-n336928及SPP1 m RNA的表达量与膀胱癌患者临床病理指标的相关性,通过Kaplan-Meier生存曲线及COX比例风险回归模型分析lnc RNA-n336928及SPP1 m RNA的表达量与入组膀胱癌患者5年生存率的关系,通过sperman相关分析明确lnc RNA-n336928与SPP1 m RNA表达的相关性;q RT-PCR检测评估膀胱癌不同细胞系中lnc RNA-n336928的表达情况,体外实验干扰lnc RNA-n336928在膀胱癌细胞系中的表达,采用CCK-8及Brdu实验检测lnc RNA-n336928对膀胱癌细胞增殖的影响,采用细胞划痕实验及transwell侵袭实验检测lnc RNA-n336928对膀胱癌细胞迁移侵袭的影响,通过q RT-PCR及westernblot检测lnc RNA-n336928表达改变后SPP1 m RNA及蛋白表达的变化。结果:基因芯片发现膀胱癌组织及癌旁正常组织存在lnc RNA和m RNA的差异表达,差异表达基因主要参与到PI3K-AKT,focal adhesion,ECM-receptor信号通路中;lnc RNA-n336928及SPP1 m RNA在膀胱癌组织中的表达量明显高于癌旁正常组织,且与膀胱癌患者临床分级、病理分级密切相关,与肿瘤大小、肿瘤数目、患者年龄、性别及患者吸烟史没有明显的相关性,Kaplan-Meier生存分析发现lnc RNA-n336928高表达组患者5年生存率明显差于lnc RNA-n336928低表达组,COX比例风险回归分析发现lnc RNA-n336928可能为膀胱癌患者不良预后的独立影响因子,而SPP1 m RNA的表达量与患者的5年生存率没有明显的相关性;CCK-8及Brdu实验证实lnc RNA-n336928的异常表达对膀胱癌细胞的增殖能力没有明显的影响,细胞划痕实验证实异常表达的lnc RNA-n336928参与调节膀胱癌细胞的迁移,transwell侵袭实验证实异常表达的lnc RNA-n336928参与调控膀胱癌细胞的侵袭行为,q RT-PCR及westernblot实验证实,lnc RNA-n336928表达发生改变后,SPP1 m RNA及蛋白的表达均发生相应的变化。结论:在膀胱癌的发生进展过程中涉及到lncRNA表达调控的异常,lnc RNA-n336928在膀胱癌组织中异常高表达,高表达的lnc RNA-n336928可能为膀胱癌患者不良预后的独立危险因子,lnc RNA-n336928对膀胱癌细胞的增殖没有明显的调控作用,lnc RNA-n336928可能参与调控膀胱癌细胞的侵袭迁移,lnc RNA-n336928可能通过对SPP1的调控参与调节膀胱癌细胞的侵袭迁移。