目的:构建miRNA-22慢病毒表达载体,上调(up-regulation)其在髓母细胞瘤细胞系DAOY和ONS-76中的表达。分析与miRNA-22分子结合靶基因的表达情况(如Casepase-3),观察髓母细胞瘤细胞(DAOY,ONS-76)增殖(MTT实验)、凋亡(流式细胞仪检测实验)等情况,阐明miRNA-22分子在髓母细胞瘤病理发生学中的作用机理。方法:1.慢病毒载体构建:构建miRNA-22真核表达质粒,设计合成miRNA-22特异性RNA序列,用于RNAi实验。2.细胞培养:选定二株髓母细胞瘤细胞系(DAOY,ONS-76)进行培养。3.转染实验:将含有miRNA-22的慢病毒以及空载体病毒转入上述细胞系,用以进行下一步的实验。4.Western blot实验:转染后,上述细胞则分别变为空载体组(DAOY-K,ONS-76-K)以及转入基因组(DAOY-Z,ONS-76-Z)。分别提取各组细胞蛋白,用Western blot技术,测定其Casepase-3的表达量。5.DAOY-K和DAOY-Z进行MTT实验,观察其生长增殖生长情况。6.DAOY-K和DAOY-Z进行流式细胞仪检测其早期凋亡。上述的实验数据通过统计软件分析,得出结论。结果:1.Caspase-3蛋白表达量分析:①DAOY-Z的Caspase-3升高,显著大于DAOY-K 的表达量(p<0.05)②ONS-76-Z 的 Caspase-3 表达量亦大于 ONS-76-K(p<0.05)。以上结果均具有统计学意义。2.DAOY-K的生长速度明显大于DAOY-Z。p=0.0034<0.05,具有统计学意义3.DAOY-Z和DAOY-K在进行流式细胞仪检测时,DAOY-Z的早期凋亡明显高于DAOY-K。p=0.000<0.05。具有统计学意义。结论:miRNA-22通过其与相关的靶点结合,调控肿瘤的生长,通过本次实验的初步研究证实其是一类起抑癌作用的分子。