人乳腺癌MCF-7细胞在不同HER-2水平下外泌型miRNAs表达谱检测

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背景:HER-2属于膜酪氨酸激酶,是表皮生长因子受体家族的成员,当HER-2基因被激活,可导致细胞增生活跃和阻碍细胞的凋亡,这为肿瘤在乳腺癌中的发展提供主要的驱动力。MicroRNAs (miRNAs)为一类内源性的非编码RNA,含有18-24个核苷酸。miRNAs主要通过肿瘤生物学如细胞增殖、分化、侵袭、细胞凋亡和转移等方面调节细胞的发生发展。研究结果显示,miRNAs既可扮演癌基因又可扮演抑癌基因参与调控基因的表达。近些年有关HER-2和miRNAs之间关系的报道日益增多,其中有些研究提示乳腺癌的发生发展与HER-2的过表达和miRNAs的失调相关联。本课题组前期的研究也显示不同HER-2表达水平的乳腺癌细胞在miRNAs表达谱上存在差异。因此,探究miRNAs和HER-2之间的联系极为重要。随着液体活检技术的临床意义逐步被人们认识,在临床上对肿瘤患者体液以及在实验室中对肿瘤培养上清内肿瘤细胞外泌物质的研究已成为研究热点。目的:检测不同HER-2表达水平人乳腺癌细胞培养上清中肿瘤细胞外泌的miRNAs,初步筛选出与HER-2表达相关的外泌型miRNAs表达谱。方法:(1)培养人乳腺癌细胞MCF-7和稳定转染HER-2的MCF-7(MCF-7/HER-2),分别收集两株细胞的培养上清,利用miRNAs芯片技术检测其miRNAs的表达,并与MCF-7和MCF-7/HER-2细胞中miRNAs表达谱进行比对。(2)应用生物信息学对miRNAs hsa-miR-5703、hsa-miR-92b-5p和miRNA hsa-miR-589-3p进行与HER-2相关的信号通路的初步预测。结果:(1)通过对样品miRNAs芯片表达谱的结果分析,对照组选取MCF-7细胞培养上清,以上调或下调≥2倍为基准,miRNAs与HER-2相关的通过筛选获得138种,其中有86个miRNAs上调,有52个miRNAs下调。在这些miRNAs中,上调高于5倍的有列举如下:hsa-miR-4489、hsa-miR-92b-5p、hsa-miR-3150b-3p、 hsa-miR-302d-5p、hsa-miR-5703、hsa-miR-583、hsa-miR-582-3p和hsa-miR-4270共8个,而下调高于5倍的有hsa-miR-589-3p。(2)将细胞培养上清液中筛选出与HER-2相关的外泌型miRNAs与本课题组前期研究细胞裂解液中筛选出与HER-2相关的miRNAs进行比对,两者中同时上调的有7种;同时下调的有7种;在细胞培养上清液中上调而在细胞中下调的有1种;在细胞培养上清液中下调而在细胞中上调的有7种。(3)生物信息学方法预测hsa-miR-5703、hsa-miR-92b-5p和hsa-miR-589-3p信号通路可能与HER-2直接或间接相关联。结论:(1)不同HER-2水平的人乳腺癌细胞外泌miRNAs存在差异性表达。(2)人乳腺癌细胞外泌miRNAs与其细胞中miRNAs含量不平行。(3)生物信息学预测提示hsa-miR-57、hsa-miR-92b-5p和hsa-miR-589-3p可能通过与HER-2相关信号通路调控肿瘤的发生发展。
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