β-甘露聚糖酶产生菌培养条件优化及酶液性质研究

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β-1,4-D-甘露聚糖酶(β-1,4-D-mannanohydrolase,EC.3.2.1.78),又称为β-甘露聚糖酶(β-mannanase),是一类内切水解酶。该酶能够水解含有β-1,4-D-甘露糖苷键的均一甘露聚糖、半乳甘露聚糖、葡甘露聚糖、半乳葡甘露聚糖,已在食品和饲料工业、医药、造纸、纺织印染、石油开采、洗涤剂等行业中得到应用。本文从实验室保存的53株菌中筛选出一株产β-甘露聚糖酶酶活较高的菌株FO-232,通过优化产酶培养基成分和培养条件提高了产酶水平,研究了FO-232液体培养后酶液的主要性质,对该酶的纯化也进行了探索,主要结果如下:1)通过液体培养对53株菌进行筛选,实验结果表明编号为FO-232的菌株产酶水平较高,并对菌株FO-232进行了分子生物学(16Sr DNA序列)鉴定,鉴定结果FO-232为枯草芽孢杆菌。2)通过实验优化了枯草芽孢杆菌FO-232产酶培养基的成分和培养条件。最优的产酶培养基组成为:魔芋粉3.5%, KNO 3100 mmol/L,蛋白胨1%, KH2PO40.1%, MgSO4 0.01%, MnCl2·4H2O 9 mmol/L。最适的培养条件为:培养基初始pH=7,250 mL三角瓶装液体培养基30 mL,培养温度37℃,培养32 h。在上述条件下,枯草芽孢杆菌FO-232经培养后酶液的酶活由最初的2.9 U/mL增加到23 U/mL。金属离子Mn2+对菌株FO-232产酶有较好的促进作用,培养基中Mn2+浓度在9 mmol/L时,对该菌株产酶促进作用最大,Mn2+浓度达到50 mmol/L时,对该酶有强烈的抑制作用。3)枯草芽孢杆菌FO-232所产的β-甘露聚糖酶的最适温度及最适pH分别是55℃和6,该酶具有较宽的pH稳定范围(4-10),并且该酶在50℃下较稳定;该酶的最佳底物是魔芋胶。降黏实验结果表明,实验条件下,酶液对槐豆胶、瓜尔胶、魔芋胶的降黏效果明显。此外,酶液经丙酮沉淀以及葡聚糖凝胶过滤两步纯化,SDS-PAGE电泳结果显示分离的酶液中有三个蛋白条带。
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