论文部分内容阅读
目的:采用RT-PCR技术检测原发性肝癌组织中DNA修复基因XPC、ERCC1和XPF mRNA表达水平,并分析各基因mRNA表达水平与肝癌临床病理特征及术后复发时间之间的关系,初步探讨三者在原发性肝癌中的表达意义及疾病进展、预后中所起的作用。方法:选取广西医科大学附属肿瘤医院2007年3月至2013年12月期间符合入组条件的73例原发性肝癌病例,并选取21例距手术切缘大于1cm的癌旁组织为对照,所有患者术前术后均未接受放化疗、介入治疗及分子靶向治疗等。提取所有标本总RNA进行电泳质控检测,应用RT-PCR方法检测肝癌组织和癌旁组织中XPC、ERCC1和XPF的mRNA表达水平,运用Western Blot(W-B)方法检测随机选取的10例肝癌组织和对应癌旁组织中三个基因的蛋白表达状况。分析各基因mRNA表达水平在癌组织和癌旁组织的差异及与肝癌临床病理特征、术后复发时间的关系。应用SPSS 17.0软件对数据进行统计分析。均以α =0.05作为检验标准,P<0. 05为差异有统计学意义。结果:1.电泳结果显示,入组标本总RNA均有不同程度的降解,但仍不影响后续的RT-PCR检测。2. XPC、ERCC1和XPF mRNA扩增曲线呈明显“S”型,指数增长期曲线基本平行,且溶解曲线呈单峰型,说明目的基因扩增效率好、扩增产物特异性高。3. XPC和XPFmRNA在癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05) ; ERCC1mRNA在癌组织中的表达水平低于癌旁组织,但差异无统计学意义(P>0.05)。XPC、ERCC1和XPF在癌组织和癌旁组织中均有蛋白水平的表达。4. XPC mRNA在合并肝硬化患者中的表达水平较未合并肝硬化患者显著增高(P<0.05)。但在其他不同的临床病理特征分组中,XPCmRNA的表达差异均无统计学意义(P>0. 05)。XPCmRNA在术后复发时间≤6m组、>6m且≤12m组、>12m且≤18m组、>18m且≤24m组及>24m组间表达水平的总体差异具有统计意义(p<0.05),其中在>12m且≤18m组表达最高,在≤6m组表达最低。XPC mRNA在术后复发时间≤12m组、> 12m且≤24m组及>24m组之间的表达存在显著差异(P<0.05),其中在>12m且≤24m组表达水平最高,而在≤12m组表达水平最低。5. ERCC1 mRNA在被膜侵犯组的表达水平较无被膜侵犯组显著降低(P<0.05)。但在其他不同的临床病理特征和术后不同时间复发分组之间,ERCC1 mRNA表达无显著差异（P>0.05)。6. XPF mRNA表达水平与术前ALT水平、肿瘤大小、被膜侵犯、TNM分期及术后复发时间相关。术前ALT水平≤2. 5倍正常值患者XPF mRNA表达水平较>2. 5倍正常值患者低。肿瘤最大径≤5cm的患者XPF mRNA表达水平较肿瘤最大径>5cm患者低。被膜侵犯的患者XPF mRNA表达水平较无被膜侵犯的患者低。TNM分期中,Ⅱ期患者XPF mRNA表达水平最低,Ⅲ期患者XPF mRNA表达水平最高,Ⅰ期患者XPF mRNA表达水平介于两者之间,差异均有统计意义(P<0. 05)。XPF mRNA表达水平在术后复发时间≤6m组、>6m且≤12m组、>12m且≤18m组、>18m且≤24m及>24m组之间具有显著差异(P<0. 05),其中在≤6m组,XPF mRNA表达水平最低,随着术后时间的延长,表达水平逐渐升高,在>12m且≤18m组表达最高,之后XPF mRNA表达水平就逐渐下降。7. XPC与ERCC1、XPC与XPF及ERCC1与XPF在肝癌组织中的mRNA表达水平均存在正性相关。XPC mRNA表达水平越低,ERCC1 mRNA的表达水平也越低;XPC mRNA的表达水平越低,XPF mRNA的表达水平也越低;ERCC1 mRNA表达水平越低,XPF mRNA的表达水平也越低。8. XPC高表达、ERCC1高表达且XPF高表达组术后2年内复发率与XPC低表达、ERCC1低表达且XPF低表达组之间的差异无统计学意义(P>0. 05)。XPC高表达、ERCC1高表达且XPF低表达组、XPC高表达、ERCC1低表达且XPF高表达组和XPC低表达、ERCC1高表达且XPF高表达组术后2年内复发率存在统计学差异(P<0.05)。结论:1. .XPC和XPF mRNA在肝癌组织和癌旁组织中的表达水平具有显著差异,癌组织中XPC和XPF mRNA表达水平显著低于癌旁组织。ERCC1 mRNA在肝癌组织的表达处于低水平状态。这三个基因在蛋白质水平均有表达。2. XPC mRNA表达水平与肝硬化密切相关,合并肝硬化,XPC mRNA表达水平就越高。ERCC1 mRNA表达水平与被膜侵犯有关,被膜侵犯,ERCC1 mRNA表达水平就越低。XPF mRNA表达水平与术前ALT水平、肿瘤大小、被膜侵犯及TNM分期相关。XPC和XPF mRNA表达水平可能与术后复发时间相关。3. XPC与ERCC1、XPC与XPF及ERCC1与XPF在肝癌组织中的mRNA表达水平均呈正性相关,XPC、ERCC1和XPFmRNA在肝癌组织中的表达降低具有一致性。4. XPC、ERCC1和XPFmRNA联合表达的状态可能与患者术后2年内复发有关。