【摘 要】
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EGX对可溶性木聚糖、对-硝基酚纤维二糖苷(pNPC)、羧甲基纤维素(CMC)的水解活性分别在53℃、55℃、50℃达到最高值,而水解这三种底物的最适pH范围分别为pH4.8-6.0、pH4.8-5.6
【出 处】
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中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院
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EGX对可溶性木聚糖、对-硝基酚纤维二糖苷(pNPC)、羧甲基纤维素(CMC)的水解活性分别在53℃、55℃、50℃达到最高值,而水解这三种底物的最适pH范围分别为pH4.8-6.0、pH4.8-5.6、pH4.4-4.8.0.2mM和100mM氯化钠存在下,0~100mM范围的纤维二糖对EGX的pNPC水解活性无抑制作用.初步结构分析结果表明EGX是一种糖蛋白,它没有二硫键,但具有2个包埋于分子内部的巯基.F<->、Cl<->、Br<->、I<->、NO<,3><->等5种一价阴离子对EGX的pNPC水解活性即外切-β-1,4-葡聚糖酶活性都是必需的,且表现出明显的激活作用.只有Cl<->和Br<->为羧甲基纤维素(CMC)水解活性即内切-β-1,4-葡聚糖酶活性活性所必须.而以上5种一价阴离子对EGX的木聚糖水解活性即内切-β-1,4-葡聚糖酶活性没有显著影响.Cl<->、Br<->、NO<,3><->三种离子均只影响pNPC水解反应的K<,m>,但并不影响V<,max>值.Cl<->离子的存在对EGX荧光光谱和圆二色性谱不产生明显影响,但能大大提高EGX的热稳定性.以福寿螺卵巢组织基因组DNA为模板,扩增得到编码EGX的基因组DNA片段.所得福寿螺EGX基因组片段长4892bp,该片段含有9个外显子和8个内含子,8个内含子分别位于开放阅读框的74bp、122bp、280bp、336bp、473bp、646bp、753bp和972bp处.证明多功能纤维素酶EGX是由福寿螺自身产生.福寿螺EGX基因的克隆证明了动物纤维素酶体系与微生物纤维素酶体系相似,也含有外切-β-1,4-葡聚糖酶,同时,还证明了在福寿螺中存在内源性木聚糖醇.这也是首次证明了动物也存在自身的木聚糖醇.EGX也是第一个被克隆的动物多功能纤维素酶基因.
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