【摘 要】
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卵巢颗粒细胞的主要功能是合成和分泌雌激素,其在卵泡募集、选择、优势化以及闭锁等过程中发挥重要作用。前人研究发现H3K27me3可能通过影响颗粒细胞的功能从而参与卵泡发育。本课题组前期研究表明H3K27me3的抑制剂能显著抑制颗粒细胞的凋亡、激动剂则显著促进颗粒细胞凋亡,但H3K27me3靶基因尚不清楚。因此,本研究以母猪卵巢颗粒细胞为研究对象,利用H3K27me3抑制剂药物EPZ005678和激动
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卵巢颗粒细胞的主要功能是合成和分泌雌激素,其在卵泡募集、选择、优势化以及闭锁等过程中发挥重要作用。前人研究发现H3K27me3可能通过影响颗粒细胞的功能从而参与卵泡发育。本课题组前期研究表明H3K27me3的抑制剂能显著抑制颗粒细胞的凋亡、激动剂则显著促进颗粒细胞凋亡,但H3K27me3靶基因尚不清楚。因此,本研究以母猪卵巢颗粒细胞为研究对象,利用H3K27me3抑制剂药物EPZ005678和激动剂药物GSK-J4分别处理颗粒细胞,采用RNA-seq技术和生物信息学分析手段,从组学水平筛选H3K27me3的靶基因,并探索靶基因的生物学功能从而了解H3K27me3调节卵泡发育的相关机制。本研究结果如下:1、H3K27me3抑制剂处理组每个样本平均得到77109653条Raw reads,激动剂处理组每个样本平均得到71574384条Raw reads;质控后,H3K27me3抑制剂处理组每个样本平均Q30值为91.4%,激动剂处理组则为93.8%;比对方面,H3K27me3抑制剂处理组每个样本比对上的reads比例平均为93.71%,唯一比对率为81.24%,类似的,H3K27me3激动剂处理组每个样本比对上的reads比例平均为96.12%,唯一比对率为84.67%;利用CPC、CNCI和Pfam三种预测软件共鉴定出1009个新的lncRNA。2、mRNA的表达量整体高于lncRNA;lncRNA的转录本长度平均为962 bp,平均转录本数目为1个,mRNA转录本平均长度为2208 bp,平均转录本数目是2个;lncRNA的开放阅读框（ORF）平均长度为234 nt,而mRNA的ORF平均长度为955nt;lncRNA外显子数目平均为3个,mRNA外显子数目平均值则为9个,两者不同。3、抑制剂组中统计到111个表达量显著上调的基因,164个表达量下调的基因;激动剂组中统计到1782个表达量显著上调的基因,2547个表达量下调的基因,筛选到CYP1A1、CTNNB1、FSHR、ESR1等与卵泡发育相关基因。差异表达基因显著富集在PI3K-AKT、Rap1、与癌症相关、肌动蛋白细胞骨架调节等信号通路。4、抑制剂组中统计到23个差异表达lncRNA的靶基因;激动剂组中统计到163个差异表达lncRNA的靶基因。本研究在颗粒细胞中共筛选到4604个H3K27me3的靶基因,靶基因主要富集在Rap1、PI3K-AKT等与卵泡发育相关的信号通路,为进一步探索H3K27me3在颗粒细胞和卵泡中的功能奠定了基础。
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