H9N2亚型禽流感非结构蛋白NS1A基因的克隆、表达及其诱导Hela细胞凋亡的研究

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本研究应用现代分子生物学的研究手段和方法研究了H9N2 亚型禽流感病毒非结构蛋白NS1A 在体外培养的Hela 细胞中的表达及其对Hela 细胞的生长抑制和诱导凋亡的作用。首先用病毒总RNA 做模板通过RT-PCR 扩增了NS1A基因,将其克隆入pMD18-T 载体,再亚克隆构建原核表达载体pET-20b-NS1A和真核表达载体pVAX1-NS1A。pET-20b-NS1A 质粒转化表达受体菌BL21(DE3)感受态细胞中,IPTG 诱导表达,表达的融合蛋白带位于30 KDa 处,表达蛋白占菌体蛋白的35%。用纯化后的NS1A 蛋白对青紫蓝兔进行常规免疫,得到较高的多克隆抗体效价(1:25600)。应用脂质体介导转染真核表达载体pVAX1-NS1A 到Hela 细胞系。转染后的HeLa 细胞出现生长抑制并伴有明显的凋亡特征,细胞数量减少,细胞核致密浓染,而且某些细胞出现核仁萎缩,荧光染色增强。本研究在国内首次观察到NS1A 蛋白在Hela 细胞中表达并表现部分活性功能,造成Hela 细胞生长抑制,发生细胞凋亡。
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