目的观察海兔素对非肥胖糖尿病（Non-obesity diabetes,NOD）小鼠自发性胰腺坏死和炎症反应的保护作用,并初步探讨其可能与肠粘膜屏障稳定及调节肠道微生物组成相关的作用机制。方法1.动物实验干预方案:将30只6周龄雌性NOD小鼠进行适应性喂养两周,随机分成两组（15只/组）,分别是海兔素干预组（Aplysin）及对照组（Control）。Aplysin组小鼠灌服150 mg/kg海兔素,对照组使用0.1 m L豆油灌胃,一天一次。每周监测体重、摄食量及空腹血糖值。干预4周后,腹腔注射戊巴比妥钠40 mg/kg麻醉小鼠,并采集血液、胰腺、空肠、结肠和结肠内容物做进一步分析。实验期间,小鼠被安置在青岛大学无特定病原体动物中心,可随意获得标准辐照的啮齿动物饲料和无菌自来水。2.苏木精-伊红（Hematoxylin-Eosin,HE）染色法用于胰腺组织病理学观察。3.透射电镜（Transmission electron microscope,TEM）用于胰腺组织及空肠、结肠组织上皮细胞超微结构观察。4.酶联免疫吸附实验（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测血清内毒素及胰岛素水平。5.免疫荧光法观察胰腺组织胰岛素分布及肠组织claudin-1、occludin、闭锁小带蛋白1（Zonula occludens 1,ZO-1）表达情况。6.免疫印迹实验（Western Blot）检测胰腺组织Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）及其下游信号因子髓样分化因子（Myeloid differentiation protein 88,My D88）、TNF受体关联因子6（TNF receptor-associated factor 6,TRAF-6）、TRIF相关接头分子（TRIF-related adaptor molecule,TRAM）、TIR结构域链接蛋白（TIR domain-containing adaptor inducing interferon-,TRIF）、核因子-κB（Nuclear factor kappa-B,NF-κB）p65、干扰素调节因子3（Interferon regulatory factor 3,IRF-3）和白介素1β（Interleukin-1β,IL-1β）、干扰素β（Interferon-β,IFN-β）蛋白,以及肠组织紧密连接相关蛋白claudin-1、occludin、ZO-1表达水平。7.EZ-link Sulfo-NHS生物素示踪实验评价肠道通透性。8.16S rRNA基因测序法用于肠道菌群分析。结果1.两组NOD小鼠的体重和摄食量无明显差异（P>0.05）。2.对照组NOD小鼠胰腺腺泡细胞发生自发性弥漫性坏死,而海兔素干预使腺泡细胞坏死性病变得到明显缓解,且海兔素组胰腺组织病理评分显著低于对照组（P<0.05）。3.两组NOD小鼠空腹血糖无显著差异（P>0.05）,且均处于正常参考值范围内;免疫荧光检测结果显示,与对照组相比,海兔素组胰腺组织胰岛素表达较多,ELISA血清学检测结果进一步显示两组血清胰岛素水平无明显差异（P>0.05）。4.ELISA结果显示,海兔素组NOD小鼠血清内毒素水平显著低于对照组（P<0.05）。5.Western Blot结果显示,海兔素组NOD小鼠胰腺组织腺泡细胞膜蛋白TLR4表达水平明显低于对照组（P<0.05）,及其下游腺泡细胞质中信号因子蛋白My D88、TRAF-6、TRAM、TRIF、IL-1β和IFN-β表达水平显著低于对照组（P<0.05）,且核蛋白NF-κB p65和IRF-3表达水平明显低于对照组（P<0.05）。6.TEM及示踪实验均显示,与对照组相比,海兔素组小鼠的空肠和结肠粘膜结构更加完整,且免疫荧光观察到海兔素组肠上皮细胞claudin-1、occludin、ZO-1蛋白表达更多。并经Western Blot检测可见,与对照组NOD小鼠相比,海兔素组空肠和结肠组织中紧密连接相关蛋白claudin-1、occludin与ZO-1的相对表达水平均较高（P<0.05）。7.16S rRNA测序结果显示,与对照组相比,海兔素组小鼠肠道菌群的多样性与组成明显不同。结论1.海兔素可有效防止NOD小鼠胰腺坏死和炎症反应。2.海兔素具有良好的抗炎作用,其对炎症反应的缓解作用可能通过抑制TLR4及其下游My D88和TRIF依赖性信号通路得以实现。此外,海兔素治疗可明显改善NOD小鼠胰腺坏死,其相关作用机制可能与修复肠粘膜上皮屏障和调节肠道微生物组成,防止内毒素肠渗漏有关。