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随着全球老龄化,联合国提出将健康老龄化作为全球解决老龄化问题的奋斗目标,绝经后女性的健康管理将会是今后的关注问题之一。阴道萎缩(VA)是一种常见于绝经后女性的疾病,由于全身雌激素水平降低,阴道组织的退化的一种常见疾病。主要表现为阴道干涩、瘙痒及性交疼痛,严重影响绝经后女性的生活质量。随着绝经后女性的人数不断增加,到2030年全球绝经后女性数量将增长到大约12亿,我国将达2.8亿,大约有超过40%的绝经后女性会出现阴道萎缩相关症状,其中约只有20%的绝经后女性愿意寻求帮助。目前的主要治疗方式为局部雌激素的补充或非激素类制剂应用以缓解症状,但许多女性因为担心使用雌激素所带来的副反应而不愿意接受雌激素治疗。目前,NAMS将非激素润滑剂推选为一线治疗药物,起到阴道保湿润滑的作用。非激素类药物种类较多,主要有水溶剂型、油基剂型、硅脂剂型、透明质酸等。阴道萎缩与阴道组织中细胞外基质(ECM)含量大量减少密切相关,胶原蛋白作为ECM的主要成分之一,在组织和器官的形成中起着重要的作用,并参与细胞功能的表达、信号传递等。胶原蛋白在生物医学应用中广泛应用的原因是其可以通过其自身聚集和交联形成具有一定强度和稳定性的纤维,同时具有出色的生物相容性和安全性。目前,已经发现28种类型的胶原蛋白,其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型蛋白在人体内含量最丰富,约占总胶原蛋白的80%~90%。其中,阴道组织含有大量Ⅲ型胶原蛋白。随着雌激素水平下降,阴道组织中胶原蛋白含量降解增加,生成增加。本课题旨在讨论Ⅲ型胶原蛋白治疗大鼠的阴道萎缩的疗效及可能涉及的相关机制,为阴道萎缩的临床治疗提供理论依据。第一部分建立大鼠阴道萎缩模型目的:通过建立大鼠阴道萎缩模型,为后续治疗提供模型基础。方法:(1)通过去势法建立大鼠阴道萎缩模型,选择6-8周正常雌性SD大鼠10只,将10只大鼠随机分为2组:(1)假手术组(n=5):麻醉消毒后,开腹暴露30min,关腹;(2)模型组(n=5):麻醉消毒后,开腹以无齿镊暴露双侧卵巢,分别结扎双侧子宫动脉后,切除双侧卵巢,还纳双侧子宫,缝合切口。(2)去势前后称重,H&E、Masson染色观察阴道上皮和阴道组织中胶原蛋白的变化。结果:经去势法构建的阴道萎缩大鼠模型,体重增加,阴道上皮变薄,结缔组织排列紊乱。结论:阴道萎缩大鼠模型建立。第二部分Ⅲ型胶原蛋白对大鼠阴道萎缩的作用及机制目的:探讨Ⅲ型胶原蛋白治疗阴道萎缩大鼠的疗效,为临床治疗提供理论基础。方法:(1)选择6-8周雌性SD大鼠45只,随机分为5组:(1)假手术组(n=10);(2)模型组(n=10):只造模,不做任何治疗处理;(3)胶原蛋白组(n=10):造模28天后,每日阴道给予Ⅲ型胶原蛋白0.5ml,连续给予14天;(4)雌激素组(n=10):造模28天后,每日阴道给予雌激素0.5ml,连续给予14天;(5)卡波姆组(n=5):造模28天后,每日阴道给予卡波姆0.5ml,连续给予14天;(2)生物素标记胶原蛋白在阴道组织中的示踪定位;(3)H&E染色观察阴道上皮厚度;Masson染色观察阴道组织中胶原蛋白排列情况;测定阴道p H值和微生态变化;(4)免疫组化、q PCR测定COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、TIMP-1、MMP-1、VEGF、Ki-67、IL-6因子的表达水平;Western blot测定阴道组织中AQP-2因子的表达水平;(5)电镜观察阴道组织微结构的改变;(6)H&E染色观察子宫内膜厚度变化;(7)诱导细胞衰老,观察细胞的增殖和凋亡情况。结果:(1)免疫荧光结果表明:经生物素标记的胶原蛋白在阴道上皮及肌层可见。(2)H&E染色结果表明经雌激素和胶原蛋白治疗后的阴道上皮厚度增厚,厚于模型组,接近假手术组。Masson染色结果表明模型组和卡波姆组结缔组织排列稀疏,经雌激素和胶原蛋白治疗后的阴道组织胶原排列较紧密,接近假手术组。(3)免疫组化和q PCR结果表明,经胶原蛋白和雌激素治疗后的阴道组织中COL-I、COL-Ⅲ、TIMP-1、VEGF、Ki-67表达高于模型组,接近假手术组;模型组阴道组织中MMP-1、IL-6表达高于胶原蛋白组和雌激素组及假手术组。Western blot结果表明,经胶原蛋白和雌激素治疗后的阴道组织中AQP-2蛋白表达水平高于模型组和卡波姆组,接近假手术组。(4)电镜结果表明:去势后,阴道上皮皱壁消失,微绒毛消失,细胞间间距变大;经Ⅲ型胶原蛋白治疗后,阴道上皮出现微绒毛,细胞之间的间距缩小,与假手术组相似。(5)H&E染色观察大鼠子宫内膜结果表明:经胶原蛋白治疗后的子宫内膜厚度与模型组接近,经雌激素治疗后的子宫内膜厚度增厚,与假手术组接近。(6)流式和CCK-8结果显示:Ⅲ型胶原蛋白能够促进D-gal诱导的衰老细胞的增殖,抑制凋亡。结论:胶原蛋白能够定植于阴道上皮及肌层中;能够促进阴道组织中COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、TIMP-1、VEGF、Ki-67、AQP-2的表达,降低的MMP-1、IL-6表达,从而促进组织中细胞外基质的生成,减少细胞外基质的降解,降低炎症因子的表达,增加组织中水的含量,促进上皮细胞增殖。同时,改善阴道微结构,促进微绒毛的生长,缩小细胞间距离。相比于雌激素,对子宫内膜有一定的安全性,不会导致子宫内膜的异常增生。同时能够促进衰老细胞的增殖,抑制凋亡。