HIF-2α通过下调PKA激活CnA/NFATc1信号通路促进慢肌纤维形成

来源 :山西农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dimitrilyyl
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骨骼肌纤维类型的转化涉及复杂的分子机制。研究表明缺氧诱导因子(HIF)-2α可诱导肌纤维类型向慢肌型转化,但其下游途径尚未阐明。本实验主要研究了HIF-2α介导的肌纤维类型转换所涉及的分子机制。主要研究内容和结果如下:(1)实验在C2C12细胞中过表达HIF-2α,利用qRT-PCR技术和western blotting技术检测慢肌和快肌标志性基因MyHC I和MyHC IIb的表达水平,实验结果表明过表达HIF-2α可以引起MyHC I的表达升高及MyHC IIb的表达下降。此外,western blotting及细胞免疫荧光结果表明,与control组相比,钙调神经磷酸酶A(CnA)蛋白表达水平升高,活化的T细胞核因子c1(NFATc1)位移至细胞核的数量增多,并且在添加了钙调神经磷酸酶抑制剂(FK-506)之后,MyHC I的表达会降低。表明CnA/NFATc1信号通路参与了HIF-2α介导的肌纤维转化。(2)我们在C2C12细胞中共转染HIF-2α与CALM2 siRNA以进一步研究HIF-2α介导的肌纤维转化。western blotting结果表明,与单独转染HIF-2α相比,CnA与MyHC I表达水平均上升,说明抑制CALM2的表达并不能阻止CnA和慢肌标志性基因MyHC I的表达升高。此外,我们将CALM2 siRNA转染至小鼠胫骨前肌,也得到了相同的结果。(3)qRT-PCR技术检测到C2C12细胞中过表达HIF-2α可下调蛋白激酶A(PKA)mRNA的表达,且在添加Forskolin(PKA激活剂)之后,western blotting结果表明,与HIF-2α过表达组相比,CnA与MyHC I表达水平均降低。PKA激活剂可抑制HIF-2α诱导的肌纤维类型转化,并且CnA途径也受到抑制。总之,本研究结果表明CnA/NFATc1信号通路参与了HIF-2α介导的肌纤维转化,且CnA/NFATc1信号是通过HIF-2α下调PKA来激活的。
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