CD147siRNA转染对Jurkat细胞体外增殖、活化、基质黏附和迁移能力的影响

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目的研究CD147siRNA转染对人T细胞淋巴瘤细胞株Jurkat细胞增殖和细胞周期的影响,以及对Jurkat细胞活化、细胞外基质黏附和迁移能力的影响。旨在初步明确CD147在人T细胞淋巴瘤细胞中的可能作用及机制,探讨将CD147作为靶分子,运用siRNA技术对人T细胞淋巴瘤进行基因治疗的可行性。方法1.将前期构建的重组质粒pSUPER/CD147siRNA稳定转染至Jurkat细胞中,采用半定量RT-PCR法和Western Blot方法分别检测转染细胞中CD147mRNA和蛋白的表达变化;2.采用MTT法检测转染pSUPER/CD147siRNA 24、48和72h后Jurkat细胞增殖水平的变化;3.运用流式细胞仪法检测转染pSUPER/CD147siRNA对Jurkat细胞周期和T细胞活化标记分子CD25表达的影响;4.用基质黏附实验检测转染pSUPER/CD147siRNA对Jurkat细胞外基质黏附能力的影响;5.用Transwell法检测CD147siRNA对Jurkat细胞跨内皮迁移能力的影响。结果1.转染pSUPER/CD147siRNA1后,Jurkat细胞中CD147mRNA和蛋白表达水平无显著下降(P>0.05),转染pSUPER/CD147siRNA2后,Jurkat细胞中CD147mRNA和蛋白表达水平显著下降,干扰效果较好的两个细胞克隆干扰效率分别为67.12%和66.68%(P均<0.001),将其建立为稳定转染的细胞株,分别命名为C2a、C2b,用于下一步的研究;2.C2a、C2b细胞在转染后24、48和72h的增殖水平均显著下降,其下降率分别为47.07%、55.27%;50.85%、54.75%;52.28%、57.21%(p<0.01);3.转染pSUPER/CD147siRNA2后,处于细胞周期G1期的Jurkat细胞由未转染时的53.00±1.87%显著减少到43.05±1.09%(C2a)和42.38±1.18%(C2b)(P均<0.01),而S期的细胞由未转染时的34.53±0.52%显著增加到47.70±0.71%(C2a)和47.32±0.98%(C2b)(P均<0.05);4.转染pSUPER/CD147siRNA2后,Jurkat细胞表面CD25分子的表达水平由9.07%下降到5.06%(C2a)、5.57%(C2b)(P均<0.05);5.转染pSUPER/CD147siRNA2后,显著下调了C2a和C2b的细胞外基质黏附能力,下降率分别为29.74%和32.17%(P均<0.01);6.CD147siRNA2转染显著下调了Jurkat细胞的跨内皮迁移能力,迁移率由64.5±7.26%下降到14.72±3.74%(C2a)and 15.39±5.75%(C2b)(P均<0.001)。结论1.建立了稳定转染pSUPER/CD147siRNA的人T细胞淋巴瘤Jurkat细胞株;2.CD147与Jurkat细胞的增殖、细胞周期、活化、基质黏附和迁移相关,可能在淋巴瘤的髓外浸润中起一定的作用;3.CD147可能是一种新的肿瘤治疗靶分子。
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