本文分两部分论述了体外诱导胚兔视网膜神经干细胞与脑神经干细胞向视网膜神经上皮细胞分化的研究。 第一部分：胚兔视网膜及脑神经干细胞(Neural Stem Cells，NSCs)的分离、培养和鉴定。 目的：分离、培养和鉴定胚兔视网膜及脑NSCs细胞，并对不同培养条件进行比较。 方法：取孕24天胚兔视网膜及大脑皮质制备单细胞悬液，分别在5种不同培养基中进行体外培养，通过连续传代使细胞纯化。采用免疫荧光法及流式细胞仪检测不同培养条件下获得的细胞对神经干细胞和视网膜神经上皮细胞抗原的表达。 结果：无血清培养基添加N2、EGF、bFGF、LIF四种因子组可以获得最佳纯化效果。传三代后nestin(+)细胞较原代细胞明显增高，说明悬浮培养法可筛选出较高纯度的NSCs。视网膜NSCs培养过程中nestin高于大脑皮质NSCs。免疫荧光法显示无血清培养条件下的两种组织来源的NSCs都部分表达nestin。 第二部分：胚兔视网膜及脑神经干细胞NSCs的体外诱导分化。 目的：体外诱导NSCs向视网膜神经上皮细胞分化，并对不同诱导条件进行比较。 方法：选取无血清条件下传三代的NSCs，撤去生长因子，分别在含5％FBS及5％FBS+全反式视黄酸(ATHA)的DMEM/F12培养基中诱导8-10天，细胞生长接近汇合时终止培养。通过免疫荧光、流式细胞术鉴定被诱导的细胞对神经干细胞和视网膜神经上皮细胞抗原的表达。 结果：诱导后NSCs生长速度加快，细胞主要分化为类神经胶质细胞及神经元细胞。视网膜NSCs经诱导后大部分突触较短，可见类神经节细胞；大脑皮质NSCs经诱导后大部分突触较长，仅在经ATRA诱导后可偶然发现类神经节细胞。流式细胞术显示两种诱导方式都有部分细胞表达 nestin，较诱导前均明显降低，而Rodopsin及CD90(Thy-1)的表达均较诱导前明显增高。经5％FBS诱导的细胞表达Rodopsin较联合应用ATRA时高，但表达CD90低于后者。与未经纯化原代即以5％FBS培养的细胞相比，经纯化再诱导的细胞表达Rodopsin及CD90较高。 结论：本试验采用悬浮筛选法成功分离和培养了高纯度的视网膜及大脑皮质神经干细胞。无血清培养基添加N2、EGF、bFGF、LIF四种因子可以获得最佳纯化效果。NSCs经5％FBS或5％FBS+ATRA诱导后表达Rodopsin及CD90上调，经5％FBS诱导的细胞表达Rodopsin较联合应用ATRA时高，但表达CD90低于后者。与未经纯化原代即以5％FBS培养的细胞相比，经纯化再诱导的细胞表达Rodopsin及CD90较高。