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目的:瞬时感受器电位香草酸受体1(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)通道是神经纤维以及具有感知功能细胞发挥感觉作用的关键分子之一。瞬时受体电位锚蛋白1(transient receptor potential ankyrin 1,TRPA1)通道常参与疼痛,热和化学感觉。TMEM100跨膜蛋白参与调控TRPV1和TRPA1通道蛋白。已有研究报道TRPA1和TRPV1通道在HODs(Human odontoblasts,HODs)细胞表达。目前尚未见HODs细胞是否表达TMEM100跨膜蛋白的相关报道。实验从细胞水平对人成牙本质细胞是否表达TRPA1、TRPV1和TMEM100蛋白进行研究,观察TRPA1、TRPV1和TMEM100三种蛋白在HODs中的表达情况和分布特点,分析在HODs上TRPA1、TRPV1和TMEM100三种蛋白是否共表达,有助于更深入地了解牙髓感觉传导机制。方法:1.收集就诊于天津医科大学口腔医院口腔颌面外科18-25岁患者,因阻生和正畸等原因新鲜拔除的完整健康的第三磨牙,进行固定,配制乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)脱钙液对牙齿进行脱钙处理、石蜡包埋和近远中向切片,通过普通苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,H&E)染色确定组织切片质量。2.通过免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色法检测牙本质涎磷蛋白抗体(Dentin sialophosphoproteins,DSPP)和巢蛋白(nestin)的表达情况,鉴定并定位成牙本质细胞(odontoblasts,ODs)层,检测TRPA1、TRPV1和TMEM100蛋白在HODs表达的情况,使用光学显微镜及图像系统采集不同部位ODs的图片观察其在ODs层分布特点。3.采用多标记免疫荧光染色(immunofluorescence,IF),基于抗原、抗体特异性结合的原理,借助不同的荧光染色燃料标记,多轮循环染色来判断TRPA1、TRPV1和TMEM100蛋白在HODs上的表达部位及共定位关系,应用多光谱成像、信号分拆技术和成像分析软件测量细胞内的染色定位,并根据染色光密度和在单个细胞基础上的染色进行定量分析。结果:1.显微镜下,普通H&E染色显示切片各组织细胞的形态完整清晰,为后续的IHC染色研究奠定实验基础。2.IHC染色结果证实在人牙髓组织切片不同部位ODs细胞均有DSPP及nestin阳性表达,并与H&E染色的ODs细胞组织学位置一致。TRPA1通道蛋白在HODs细胞胞体及细胞突起均明显呈阳性表达。TRPV1通道蛋白在HODs细胞胞体及近细胞突起明显表达,TMEM100蛋白主要在HODs细胞胞体和细胞突起呈弱阳性表达。3.多标记IF染色显示,同一切片同一视野下,在HODs细胞层中TRPA1、TRPV1和TMEM100蛋白共同表达。在ODs细胞胞体和突起,三者表达部位具有高度重叠区域,且三者相关关系分析显示,在ODs上,TRPA1~+、TRPV1~+、TMEM100~+三个变量之间存在显著的强相关。结论:1.IHC研究结果表明TRPA1和TRPV1通道蛋白在HODs细胞胞体及细胞突起均明显呈阳性表达。TMEM100蛋白主要在HODs细胞胞体和细胞突起呈弱阳性表达。2.多标记IF染色研究表明部分HODs细胞胞体及突起中TRPA1、TRPV1和TMEM100蛋白共同表达,在ODs上,TRPA1~+、TRPV1~+、TMEM100~+三个变量之间存在显著的强相关。提示HODs细胞上TRPA1和TRPV1、TMEM100蛋白可能共表达并相互作用。