传染性支气管炎(Infectious Bronchitis，IB)是鸡的一种病毒性呼吸道和泌尿生殖道疾病，是引起家禽养殖业重大经济损失的疾病之一，临床表现为咳嗽、打喷嚏、体重减轻、产蛋量下降、蛋壳的质量下降等等。 本研究以致病性较强的传染性支气管炎毒株IBV M41株为研究对象，研究在不同温度和湿度条件下15天龄SPF鸡单独感染IBV以及混合感染IBV和O<,1>型大肠杆菌的发病情况。结果表明在湿冷条件下(16℃-18℃，相对湿度70％-80％)，传染性支气管炎M41株和O<,1>型大肠杆菌混合感染15天龄非免疫来航鸡，可引起约80％左右的雏鸡死亡，而在单独感染IBV或E.coli O<,1>以及在正常室温环境条件下(25℃-27℃，相对湿度是30％-50％)，不发生死亡或很少死亡。本实验初步建立起了传染性支气管炎的发病模型，可用于评价传染性支气管炎弱毒疫苗的保护效力和筛选强毒毒株。 本研究采用RT-PCR方法扩增出IBV M41株的N基因。进一步将IBV M41毒株的N基因cDNA插入pET-28a表达载体质粒中，构建了原核表达载体质粒pET-28a-N。将其转化E.coli BL21(DE3)pL.rsS,经IPTG诱导表达后，产生分子量约为50KD的特异产物。经Western blot印迹分析证实该表达产物可与抗IBV M41毒株的多克隆抗体良好结合。利用所表达的N蛋白作为EIASA板的包被抗原，建立了诊断IBV的ELISA方法，并以商品化的以全病毒作为ELISA板包被抗原的ELISA试剂盒作对照。结果表明每孔包被360ng的重组N蛋白是比较理想的包被量，血清样品的稀释度为1:300时最佳。以重组N蛋白为包被抗原的ELISA方法的临界值是S/P=0.12，批内和批间试验表明该方法的变异系数小于10％。特异性检测结果表明，该ELISA方法仅能检出IBV抗体而对用H5亚型禽流感病毒、新城疫病毒、O<,1>型大肠杆菌免疫的鸡血清进行检测均为阴性，说明该方法对IBV抗血清有高度的特异性，以Civtest公司的ELISA试剂盒作为参照对用不同IBV毒株感染的鸡血清进行检测均能检出阳性抗体且检测结果一致，说明该方法的敏感性良好。以自行研制的ELISA方法与Civtest公司的EIASA试剂盒同时对353份来自不同养殖场的临床血清进行检测，结果表明两种试剂盒对阳性样品检出率100％一致，说明该方法可用于检测临床血清。 在此基础上，本研究制备了传染性支气管炎J1株弱毒疫苗和G4株、J1株的灭活油乳剂疫苗，利用已建立的IBV人工发病模型评价IB毒株的致病性和评价弱毒疫苗的保护效力，并结合自行研制的ELISA方法对注射灭活疫苗和弱毒疫苗后产生的抗体水平进行了监测。致病性结果表明，J1株和H120株具有较低的致病性而M41株则具有较强的致病性：免疫保护试验结果表明，J1株弱毒疫苗的保护率为93.3％与商品弱毒疫苗H120的保护率相近，说明IBV人工发病模型可用于评价IB毒株的致病性和评价弱毒疫苗的保护效力。ELISA方法抗体检测试验结果表明，注射G4株灭活苗、儿株灭活苗和G4株与J1株双价灭活油乳剂疫苗后产生的抗体水平与商品灭活疫苗Ma5的抗体水平相近，在二免后一周S/P值分别达到0.4±0.04、0.36±0.05和0.34±0.06；J1株弱毒疫苗7日龄、14日龄和21日龄时S/P值分别达到0.28±0.04、0.54±0.05和0.62±0.06与商品弱毒疫苗H120的抗体水平相近，在28日龄时两组的S/P值趋向一致分别为0.68±0.06和0.66±0.07，说明该ELISA方法可以用作检测IB疫苗抗体水平。