HIV-1病毒载体疫苗的构建及其表达蛋白的抗原性和免疫原性的研究

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众所周知,艾滋病是有艾滋病病毒引起的一种疾病。现在每时每刻都在全世界传播。人类正面临着挑战,就是研究和开发出相关的免疫血清,但是因为它的特殊性:双链RNA逆转录病毒,易突变,直接攻击人的免疫系统,所以仍不能治愈艾滋。所以我们应该认清构建抗HIV-1疫苗和疫苗免疫策略是极其重要的. 一个有效的抗HIV的疫苗应该是可以引起中和抗体的产生和长时间的细胞毒T细胞的杀伤作用。以前的一些研究资料表明,用重组病毒样颗粒(VLP)进行免疫既可以引起相当的血清抗体滴度,也可以引起辅助性T细胞和细胞毒性T细胞的免疫应答。HIV的gas-pol基因在体外可以组装成VLP,所以我们构建了表达HIV-gag-pol基因的这种重组病毒. 痘苗病毒做为一种载体在外源抗原蛋白的递呈方面有着很大的潜力。因为这类病毒不能感染人和大多数哺乳动物细胞,却可以有效地将外源基因编码的蛋白递呈给宿主免疫系统。 与那些有复制能力的痘病毒相比,修饰过的牛痘痘病毒(MVA)丧失了在人和大多数哺乳动物细胞中的复制能力除了BHK细胞和鸡胚细胞。由于病毒基因的复制终止发生在病毒形态形成的晚期,也就是在早晚期蛋白合成之后,所以,MVA相对于其他活病毒载体而言,提供了一个更加安全有效的选择。在我们的工作中,我们成功的构建了穿梭载体,pscll,这个载体插入了HIV的gag-pol基因,利用了胸苷激酶(TK)基因,一段病毒基因组的非必需区,我们用同源重组的方法将HIV-gag-pol基因连接到病毒载体的基因组上。为了提高产物蛋白的表达量,我们消除了一些抑制野生型HIV-gag-pol表达的因子。并且在HEK293细胞中做了转染,结果显示与未经修饰过的HIV-gag-pol相比,修饰后的基因表达水平较高。我们还用中国HIV-1阳性血清作为一抗,通过western-blot,分析了重组病毒的抗原性,结果显示M-PG的表达产物可以被抗体很好的识别,表明rMVA有较好的抗原性. 我们还通过DNA初次免疫,rMVA增强免疫的方法,分析了M-GP的免疫原性。在间隔的几天里,我们用western-blot的方法检测到了鼠体内的HIV-1阳性血清。从照片上可以清楚地看<WP=68>到p24的抗体和p55的抗体。这不仅说明初次免疫/增强免疫策略的成功,还表明了M-GP有很好的免疫原性. 我们还构建了可以和FPV基因组发生重组的穿梭载体,plw9和psc11。他们的区别在于含有不同的启动子,因为强启动子可能在病毒载体系统的基因表达上起关键的作用。但是很遗憾,这个工作没有完成,下一步的工作是完成重组病毒的构建,筛选并纯化病毒,转染细胞,比较这两种启动子在rFPV中的表达效果
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