手足口病是一种由肠道病毒引起的传染病，感染该病的主要是婴幼儿，感染该病的患者主要表现出低热、手、足、口等部位出现疱疹，大部分患者一周左右可以自愈，少部分患者会引起并发症，个别严重的患者甚至死亡，目前，还没有针对该病的有效治疗药物。引发手足口病的肠道病毒有20多种，其中柯萨奇病毒A16型（Cox A16）和EV71病毒（EV71）是最常见的两种。而感染手足口病后症状较严重的大多是由 EV71病毒引起的，由于 EV71病毒引起的手足口病发病急、传染快、致死率高、致残率高，我国卫生部已将其列入丙类传染病进行防控治疗。　　EV71病毒属于小 RNA病毒科肠道病毒属，据目前报道该病毒存在3个亚型，亚型A、B和C。其中亚型B又可分为亚型B1～B5,亚型C分为亚型C1～C4，目前我国流行的 EV71病毒感染病例主要是由亚型 C4引起的。EV71病毒是目前肠病毒属中发现最晚的病毒，它的感染性特别强而且致病率非常高， EV71病毒引起的手足口病容易造成患者心、脑、神经系统等功能的障碍，最终因治疗无效引发患者病重身亡，EV71引起的手足口病对人类健康、尤其婴儿健康造成巨大威胁，但目前仍无特效抗病毒药物和商品化疫苗问世，因此，EV71预防疫苗的研发，手足口病例的快速而有效的检测，治疗性抗体的制备等研究具有极其重的临床意义和社会意义。　　本实验我们以纯化的 EV71全病毒作为抗原，免疫 BALB/c小鼠，利用细胞融合技术，使小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞融合，得到杂交瘤细胞，通过杂交瘤细胞的培养、杂交瘤细胞的克隆化、结合酶联免疫技术，最终筛选出分泌单克隆抗体的五株杂交瘤细胞。同时利用杂交瘤细胞注射小鼠腹腔，收集腹水获得大量的特异性结合EV71全病毒的广谱性鼠源单克隆抗体。　　我们将筛选出的单克隆抗体4F12作为包被抗体，EV71疫苗作为抗原，2B6-HRP作为酶标抗体建立双抗体夹心ELISA法，我们通过对抗体包被量、抗原检测范围、酶标抗体的稀释浓度以及封闭液包被液等的优化，最终确定了双抗体夹心 ELISA的方法，其中抗体包被量为100ng、酶标抗体稀释度为1：5000、抗原检测范围为0.15625 ng/μL～5ng/μL，最终绘制的标准曲线线性好，　　检测限为0.16 ng/μL。我们对该方法做了性能评价，发现该方法准确性好，稳定性好,为日后EV71试剂盒的商业化开发奠定了理论基础。