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研究背景:乳腺癌是全世界妇女中最常见的癌症类型。每年约有252710名妇女诊断患有乳腺癌,占妇女癌症总数的30%。尽管乳腺癌患者的转移和死亡率已降低,但远处转移仍然是大多数癌症死亡病例的罪魁祸首。远处疾病涉及多种复杂的机制,包括浸润及迁移、血管生成、失巢凋亡抵抗和上皮间充质转化(EMT)。因此,需要更好地理解这些分子机制,以促进制定更准确的预后指标以及更有效的治疗策略。近年来,micro RNA(miRNA)在乳腺癌转移中的作用,迄今为止在众多分子成员中越来越受到人们的重视。研究目的:首先探测miR-190在乳腺组织及乳腺癌组织中个别的表达水平,再用统计学分析探讨临床病例中miR-190在乳腺癌中的发展作用中的功能及其作为潜在的分子标志物是否有能做为预测乳腺癌患者预后的临床功能。通过各种细胞学实验探讨miR-190在对乳腺癌生物学行为的影响,并试阐明miR-190调控乳腺癌恶性表型的分子机制。研究方法:1.我们使用RT-q PCR方法检测30例配对的癌旁正常乳腺组织及200例乳腺癌组织miR-190表达水平,Log-rank和Kaplan-Meier生存曲线检测分析miR-190表达水平与患者五年无病生存(5-year Disease-Free Survival,DFS)和总生存(5-year Overall Survival,OS)的关系,配对t检验比较miR-190在癌组织及正常组织中的表达状态;再使用TCGA数据库验证本研究结果。2.使用实时RT-q PCR方法检测不同类型的乳腺癌细胞系中miR-190的表达水平,接着分析乳腺癌细胞生物学行为和发展程度与miR-190表达水平是否有关连。3.外源转染miR-190 mimcs和anti-miR-190分别使低表达miR-190的乳腺癌细胞过表达miR-190和过表达的乳腺癌细胞抑制内源性miR-190表达,接着经由克隆形成、MTT及EdU等细胞学实验观察miR-190对乳腺癌细胞增殖能力的影响,使用Transwell等细胞学实验实验观察miR-190对乳腺癌细胞侵袭能力的影响;4.首先使用生物信息学预测miR-190下游调控的靶基因,接着经由双荧光酶报告系统结合定点突变技术探究miR-190对下游潜在靶基因SMAD2的调节活性有无影响,最后通过Western blot和RT-PCR探测miR-190对SMAD2表达水平有无任何影响;5.首先使用Western blot和RT-PCR探测miR-190和SMAD2表达对上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)标志物E-cadherin和Vimentin、N-cadherin的表达水平有无影响。接着经由RT-q PCR探测乳腺癌组织中SMAD2表达水平与miR-190表达水平并观察2者之间有无相互影响。研究结果:1.在配对癌旁正常组织中miR-190的表达高于乳腺癌组织(P<0.001);在miR-190低表达的乳腺癌患者中的5年总生存(P=0.012)和5年无病生存(P=0.044)皆低于高表达miR-190患者的5年总生存和5年无病生存;2.与MCF10A细胞相比,miR-190在所有乳腺癌细胞系中的表达均降低;3.miR-190的表达多寡对MCF10A和MDA-MB-231的细胞增殖方面没有明显影响;但是在MDA-MB-231细胞中过表达miR-190能使乳腺癌细胞的侵袭能力被抑制,并且在MCF10A细胞中抑制miR-190的表达能使乳腺癌细胞的侵袭能力增加;4.生物信息学预测miR-190下游调控的靶基因,发现miR-190潜在的结合位点在SMAD2 3’-UTR区中;接着使用双荧光报告系统发现SMAD2 3’-UTR的活性能被miR-190降低;进一步配合使用位点突变技术发现,miR-190结合位点突变的SMAD2 3’-UTR活性不能被miR-190降低,在过表达miR-190的MDA-MB-231乳腺癌细胞中发现SMAD2 m RNA及蛋白的表达水平是下降的趋势,在降表达miR-190的MCF10A的乳腺细胞中SMAD2 m RNA和蛋白的表达水平是上升的趋势。最后使用统计学分析临床标本中,发现SMAD2表达水平与miR-190表达水平呈负相关的结果(r=-0.541,P=0.002);5.在低表达miR-190的MDA-MB-231乳腺癌细胞中过表达miR-190能让上皮标志物E-cadherin上调,使间质标志物Vimentin、N-cadherin下调,在高表达miR-190的MCF10A乳腺细胞中降表达miR-190能使上皮标志物E-cadherin下调,使间质标志物Vimentin、N-cadherin表达上调。TGFβ1作用于MCF10A乳腺细胞后导致miR-190的表达下调。研究结论:1.miR-190的表达如下调是乳腺癌患者发现早发转移及进展的分子标志,并且是乳腺癌患者预后预测的独立因素;2.miR-190调控的靶基因是SMAD2;3.乳腺癌细胞的侵袭能力和上皮-间质转化进展可通过miR-190抑制SMAD2表达来进行抑制。