小梅山猪初情期前后下丘脑差异表达基因的筛选与鉴定

来源 :扬州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cau_hechun1
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目前,国内外相关学者对各种动物初情期的调控因子做了多方面的研究,阐明了类固醇激素、生长因子、神经递质、体脂代谢信号等对下丘脑神经元释放GnRH的影响。但除了以上所述的调控因子对猪初情期启动有调节作用外,是否还存在未知调控基因,影响猪初情期的启动尚不清楚。本研究的目的是通过RT-PCR、差异显示PCR(DDRT-PCR)、反向Northern(Reverse Northern)、荧光定量PCR(real time PCR)等分子生物学技术,对小梅山猪初情期前后下丘脑差异表达的未知基因进行筛选、鉴定,并与其在不同生理发育阶段的表达变化规律联系起来,探索这些基因在猪初情期启动机制中的作用,为丰富动物生殖机理和早熟品种选种选育提供理论基础。主要研究结果如下:试验用初生、初情期、性成熟期纯种小梅山母猪各3头,取出生(0日龄)、初情期(70日龄)(Ⅰ组)以及初情期(70日龄)、性成熟期(150日龄) (Ⅱ组)各三头小梅山猪下丘脑总RNA,各取10μl组成总RNA池30μl。共组成两组、四个RNA池。采用10条锚定引物,10条随机引物组成100种引物组合进行DDRT-PCR,共获得12条差异表达条带,通过NCBI比对发现其中4条序列与已知基因高度同源,分别命名为MS01(355bp),MS02(391bp),MS03(241 bp),MS04(281 bp)。MS01与猪脑特异性血管生成抑制因子(bpai)高度同源,同源性为98%,GenBank登录号为XM001925295。MS02与猪脑脂肪酸结合蛋白基因(fabp7)有高度同源性,同源性为93%,GenBank登录号为DQ000160。MS03与猪13号染色体上一段功能未知的序列同源,同源性为86%,GenBank登录号为CU633348。MS04与人的胶原蛋白剪接变体有较强的同源性,同源性为95%,GenBank登录号为DQ644568。其他序列在数据库中均无相同基因。最后通过Reverse Northern、real time PCR定性和定量检测各基因表达水平。定量结果显示:猪下丘脑三个发育阶段中,bpai mRNA表达水平呈下调趋势,并且初生时该基因的表达量与初情期以及性成熟期相比,差异表达显著( P<0.05),本实验结果提示,下丘脑在出生至性成熟发育过程中,这一因子参与其中,为初情期时下丘脑神经元的脉冲式释放提供通路保障,起着管道迅速发育的导向作用;fabp7 mRNA在下丘脑三个不同发育阶段中,表达水平呈上调趋势,差异表达不显著( P>0.05),本实验结果提示,脂肪酸调节因子在小梅山猪中其表达量随着生长日龄的增加是逐渐递增并蓄积的一个过程,该因子作为脂肪酸的受体,增强脂肪酸及其衍生物的亲和力,促进脂肪酸的摄取,推测该因子能进一步增加猪体内脂肪的蓄积,而脂肪进一步蓄积的结果直接影响猪体的营养状况,当脂肪蓄积量达到猪初情期启动所需体脂水平时,进而协同其他调节因子共同参与猪初情期的启动。
其他文献
目的:探究分析全麻要腰硬联合麻醉用于髋关节置换术的临床研究.方法:选取2015年4月至2017年5月于我院实施髋关节置换术的患者83例为研究对象,随机分为选择全麻的对照组(41例)
目的:研究门冬胰岛素30与二甲双胍治疗2型糖尿病的效果.方法:选取我院在2016年3月-2017年3月收治的33例2型糖尿病患者进行分组研究,按照抽签法分为对照组(n=16)和实验组(n=17
目的:探讨儿科婴幼儿患者佩戴手腕带执行欠佳的原因分析及对策.方法:选取2014年5月至2016年9月年我院收治的婴幼儿患者227例,采用问卷调查法对其腕带佩戴情况及执行欠佳原因
目的:探讨持续性异位妊娠患者的临床诊治方法及效果.方法:抽取2013年6月-2017年6月期间我院收治的持续性异位妊娠患者20例,治疗方案为:米非司酮100m g,每12小时一次共5天,甲
哈尔滨市档案局机关《学习论坛》品牌自2011年始,迄今已走入第4个年头,经历了从《讲坛》到《论坛》的巨大转变,充分体现出市档案局在党员干部教育上勇于突破,敢于创新的观念
大兴安岭作为我国最大的国有林区,有着“绿色宝库、世界氧吧、避暑胜地”的美誉。在这里承载着大江南北众多开发建设者的梦想,践行着“广阔天地、大有作为”的誓言。1970年12
目的:针对焦虑症患者的心理进行讨论,并提出相关护理措施.方法:选取100例焦虑症患者为例,随机分为观察组与对照组,观察组(50)例给予综合护理,对照组(50)例采取常规护理对比分
目的:研究不同手术方式对直肠癌根治术后患者胃肠功能恢复的影响.方法:本研究的100例研究对象均选自于2013年2月至2017年2月期间,我院接受直肠癌根治术的患者,将其分为开腹组
目的:探讨临床上对需要行胃大部切除术的胃癌患者实施加速康复外科护理干预措施所起到的辅助治疗效果.方法:采取随机实验法,以我院收治的114例需要行胃大部切除术的胃癌患者
目的:观察柴胡疏肝散治疗儿童多发性抽动症常见证型的临床疗效.初步探讨多发性抽动症的诊疗机理.方法:88例儿童多发性抽动症患儿均给予柴胡疏肝散口服1个月治疗;观察YGTSS评