【摘 要】
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研究背景:急性胰腺炎（Acute Pancreatitis,AP）是一种常见的炎症反应性疾病,可导致多器官功能衰竭,急性发作时死亡率高。液体复苏、镇痛以及给予营养是临床上最基本的医治手段。目前人们对AP治疗药物的研究,多使用大鼠、小鼠等实验动物构建急性胰腺炎动物模型,缺乏通过犬、灵长类动物等建立AP模型的相关研究,本研究采用了与人体生理学差异更小的比格犬完成建模,为急性胰腺炎稳定模型的构建方法提供
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（31902224） the National Natural Science Foundation of China （31902224）
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研究背景:急性胰腺炎（Acute Pancreatitis,AP）是一种常见的炎症反应性疾病,可导致多器官功能衰竭,急性发作时死亡率高。液体复苏、镇痛以及给予营养是临床上最基本的医治手段。目前人们对AP治疗药物的研究,多使用大鼠、小鼠等实验动物构建急性胰腺炎动物模型,缺乏通过犬、灵长类动物等建立AP模型的相关研究,本研究采用了与人体生理学差异更小的比格犬完成建模,为急性胰腺炎稳定模型的构建方法提供参考。奥曲肽作为一种生长抑素类似物,有抑制胃肠胰腺系统分泌多肽类激素,调节胃肠活动的功能,被广泛应用于多种疾病的临床治疗上。本研究对奥曲肽冻干粉针制剂的制备工艺进行优化,筛选制备处方并探索产品稳定性,制得的奥曲肽冻干粉针对犬急性胰腺炎模型的治疗效果上进行探索,以期为AP的高效诊治提供新的思路。实验目的:优化奥曲肽无菌冷冻干燥制剂的处方工艺,探索拉曼光谱检测方法用于奥曲肽含量测定,以期为奥曲肽冻干制备和质量标准评价研究提供参考。探讨犬急性胰腺炎模型的构建方法和奥曲肽冻干粉针制剂对胰腺炎模型犬的疗效,为临床研究提供实验依据。实验方法:1.依据《中国药典》中冻干粉针的质量标准要求,对制备的多个不同处方进行筛选,真空冷冻干燥制备样品,对制备的奥曲肽冻干制剂在不同条件下的稳定性进行考察。2.选取奥曲肽丙氨酸的单基取代苯基环的伸缩振动峰为特征峰,建立奥曲肽水溶液的拉曼光谱定量分析方法,优化相关色谱条件。3.选取健康比格犬,采用胆胰管逆行注射法进行手术,注射配置好的牛黄胆酸钠和胰蛋白酶获得的造模溶液,构建犬急性胰腺炎模型。4.选取12只健康比格犬,随机分为对照组、常规治疗组和奥曲肽治疗组三组,每组四只比格犬。手术造模建立AP模型,对照组术后注射生理盐水,对常规治疗组和奥曲肽治疗组进行术后治疗,检测术前、术后1～7d各组比格犬的血清脂肪酶水平、血清淀粉酶水平,影像学检查及血常规等各项生理指标,对奥曲肽疗效进行评价。结果:1.确定了奥曲肽冻干粉针的规格为0.05mg,筛选出制备处方:0.05mg奥曲肽,15mg右旋糖酐40,15mg甘露醇,1ml注射用水,p H值范围为4.5～6.5。2.确定了奥曲肽质量标准评价的拉曼光谱方法:选取奥曲肽丙氨酸的单基取代苯基环的伸缩振动峰为特征峰,拉曼位移1000cm-1;拉曼光谱仪设定参数:范围为400～1500cm-1,He-Ne激光器波长输出为532nm,物镜倍数调至50倍,激光衰减参数为10%,分辨率设为1cm-1,曝光时间设定30s,积分3次,对15到30个点随机进行检测。3.术后监测结果显示建模犬术后特异性蛋白检测为阳性;血清脂肪酶水平、血清淀粉酶水平等生理指标较术前明显上升;超声影像显示胰腺肿大,回声异常,符合急性胰腺炎特征,犬急性胰腺炎模型建立成功。4.术后监测结果显示对照组、常规治疗组、奥曲肽治疗组术后血清脂肪酶水平、血清淀粉酶水平等生理指标较术前显著升高,特异性蛋白检测均显示阳性,模型构建方法稳定可重复。术后监测脂肪酶等各项相关指标,奥曲肽治疗组淀粉酶与脂肪酶水平显著降低（P＜0.01）,术后2～5d疗效差异显著,超声结果良好。结论:1.筛选出优化的奥曲肽制备处方:0.05mg奥曲肽,15mg右旋糖酐40,15mg甘露醇,1ml注射用水,p H值范围为4.5～6.5,实验证明该方法稳定性良好。2.本研究首次建立拉曼光谱测定奥曲肽水溶液的分析方法,仪器设定检测范围为400～1500cm-1,He-Ne激光器波长输出为532nm,该条件下对奥曲肽进行检测,方法有效。3.逆行胆胰管注射牛黄胆酸钠和胰蛋白酶复合液可以稳定建立犬急性胰腺炎模型。4.应用奥曲肽治疗比格犬急性胰腺炎效果显著,减少并发症的出现。
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