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在骨组织工程研究领域中,骨原细胞来源是制约骨组织工程研究与应用的关键问题,以往研究多采用骨髓基质干细胞、脂肪干细胞等作为种子细胞向成骨细胞诱导分化,但结果并不理想。因此需要为骨组织工程研究寻找一种理想的种子细胞。目的：1.验证KM×129／SV小鼠孤雌胚胎干细胞的全能性,证实其具有向成骨细胞定向分化的潜能；2.探索孤雌胚胎干细胞向成骨细胞定向诱导分化的条件,鉴定诱导的成骨细胞；3.观察诱导的孤雌胚胎干细胞种植于三维支架珊瑚上的贴附和生长情况。方法：将孤雌胚胎干细胞在体外稳定培养,通过碱性磷酸酶染色,全能性表面抗原SSEA-1、端粒酶和细胞因子的免疫组化染色,RT-PCR检测全能性转录因子,孤雌胚胎干细胞体内分化检测验证KM×129/SV孤雌胚胎干细胞的全能性。通过向培养液中添加地塞米松、p-磷酸甘油、维生素C等成骨细胞诱导因子,直接诱导孤雌胚胎干细胞向成骨细胞定向分化,通过RT-PCR检测成骨细胞相关基因、透射电镜、茜素红、von Kossa染色等方法检测孤雌胚胎干细胞向成骨细胞定向分化的情况。并将诱导7天后的孤雌胚胎干细胞接种于三维支架材料珊瑚上,通过激光共聚焦显微镜和扫描电镜观察细胞在材料上的生长情况。结果：实验结果显示：1.KM×129/SV小鼠孤雌胚胎干细胞在体外培养条件下能够稳定增殖,碱性磷酸酶染色呈阳性,表达全能性表面抗原SSAE-1和全能性转录因子Nanog、Oct4和Sox2,具有高水平的端粒酶活性,处于未分化状态；在体内可以分化为三个胚层的细胞类型,具有全能性。2.用所建立的成骨细胞诱导条件诱导孤雌胚胎干细胞定向分化,诱导过程中细胞形态发生显著变化；诱导28天时表达成骨细胞相关基因Ⅰ型胶原和骨钙素,茜素红、von Kossa染色均呈阳性,诱导的细胞发生矿化,形成钙结节；线粒体、高尔基体增多,形成电子密度较高的矿化物。3.诱导7天的孤雌胚胎干细胞种植于珊瑚材料上,激光共聚焦显微镜和扫描电镜观察显示细胞在珊瑚表面贴附良好,并能稳定增殖。传代,具有与胚胎干细胞相似的全能性,通过直接诱导的方法可以将孤雌胚胎干细胞定向诱导为成骨细胞,接种于三维支架材料珊瑚上生长良好。表明孤雌胚胎干细胞适宜作为骨组织工程的种子细胞,通过进一步研究能够找到更为优化的诱导条件,提高孤雌胚胎干细胞体外诱导成骨细胞的效率,使该方法最终应用于临床治疗中。