论文部分内容阅读
目的：
以嘧啶为母核，以DDR1为作用靶点，设计合成了三个系列共45个4,6-二取代嘧啶二取代类衍生物，并对所合成的目标化合物进行了抗NSCLC活性初探和评估。
方法：
1.本文以4-氨基-5，6-氯嘧啶为原料，以成醚反应，以及亲核取代等原理合成了45个4,6-二取代嘧啶类衍生物。其纯度经过了HPLC检测，绝大部分纯度在95％以上，其结构均经MS、1H NMR和13C NMR进行了确认。
2.采用化合物的体外激酶活性筛选对合成的45个化合物进行DDR1激酶初筛。
3.采用MTT法测定目标化合物在10μM浓度下对BEAS-2B(肺正常细胞）的增殖影响，即毒性实验。进一步地，对所有化合物进行抗肿瘤初筛，所选的细胞种类包括A549和PC-9GR（该系列细胞株均是DDR1高表达非小细胞肺癌细胞株）以及PC-9（EGFR L858R突变）。
4.选取A549,PC-9GR两种细胞株，测定化合物C1和YFQ07的IC50值。
5.选择具有细胞活性的化合物C1进行集落实验和迁移实验。
结果：
1.合成C、B、A三个系列，共45个4,6-二取代嘧啶二胺类衍生物，经SCI finder查询确认45个化合物都是没有报道过的新化合物，并通过1H-NMR、13C-NMR和MS确认结构正确。
2.在体外激酶实验中，在10μM的浓度下，部分化合物对DDR1的抑制率超过了50％。分别为：C1为92％，A1为68.3％，A2为53％，A3为91％。
3.MTT结果显示，BEAS-2B(肺正常细胞）在被大部分目标化合物作用后，存活率较高，约为70~95％。在所测试的非小细胞癌细胞株A549和PC-9GR在10μM浓度下,其中C1、B2、B4、B5、B6、B7、B10、A1、A2对A549细胞抑制率在50％以上，C1、C5、C6、C14、C15、C22、C26、B1、B3、A1、A2、A3对PC-9GR细胞抑制率在50％以上。此外我们发现这批化合物在10μM下，大部分化合物对PC-9细胞（EGFR L858R突变）的抑制率大于50％。
4.对于初筛抑制率较高的化合物C1和先导化合物YFQ07测定了相应的IC50值。C1对两株DDR1高表达的细胞IC50值分别为：PC-9GR细胞（DDR1高表达细胞）为1.59±0.36μM，A549为3.18±0.68μM。YFQ07对PC-9GR细胞（DDR1高表达细胞）为1.8±0.81μM，A549(DDR1高表达)为3.11±0.38μM。
5.化合物C1能够抑制肿瘤细胞集落的形成以及肿瘤细胞的迁移。
结论：
合成的45个化合物均对肺正常细胞毒性小，并且在10μM DDR1激酶初筛中，抑制率C1为92％，A1为68.3％，A2为53％，A3为91％，其中最好的化合物为C1，在10μM下对DDR1的抑制率为92％效果显著优于先导化合物YFQ07为26％。在细胞实验层面，C1对PC-9GR的IC50值为1.59±0.36μmol，它的效果优于YFQ07的IC50值1.8±0.81。此外发现我们设计合成的化合物对PC-9细胞（EGFR L858R突变）抑制率大部分超过了50％，并且C1能够抑制肺癌细胞集落的形成，以及能够抑制肿瘤细胞的迁移。
以嘧啶为母核，以DDR1为作用靶点，设计合成了三个系列共45个4,6-二取代嘧啶二取代类衍生物，并对所合成的目标化合物进行了抗NSCLC活性初探和评估。
方法：
1.本文以4-氨基-5，6-氯嘧啶为原料，以成醚反应，以及亲核取代等原理合成了45个4,6-二取代嘧啶类衍生物。其纯度经过了HPLC检测，绝大部分纯度在95％以上，其结构均经MS、1H NMR和13C NMR进行了确认。
2.采用化合物的体外激酶活性筛选对合成的45个化合物进行DDR1激酶初筛。
3.采用MTT法测定目标化合物在10μM浓度下对BEAS-2B(肺正常细胞）的增殖影响，即毒性实验。进一步地，对所有化合物进行抗肿瘤初筛，所选的细胞种类包括A549和PC-9GR（该系列细胞株均是DDR1高表达非小细胞肺癌细胞株）以及PC-9（EGFR L858R突变）。
4.选取A549,PC-9GR两种细胞株，测定化合物C1和YFQ07的IC50值。
5.选择具有细胞活性的化合物C1进行集落实验和迁移实验。
结果：
1.合成C、B、A三个系列，共45个4,6-二取代嘧啶二胺类衍生物，经SCI finder查询确认45个化合物都是没有报道过的新化合物，并通过1H-NMR、13C-NMR和MS确认结构正确。
2.在体外激酶实验中，在10μM的浓度下，部分化合物对DDR1的抑制率超过了50％。分别为：C1为92％，A1为68.3％，A2为53％，A3为91％。
3.MTT结果显示，BEAS-2B(肺正常细胞）在被大部分目标化合物作用后，存活率较高，约为70~95％。在所测试的非小细胞癌细胞株A549和PC-9GR在10μM浓度下,其中C1、B2、B4、B5、B6、B7、B10、A1、A2对A549细胞抑制率在50％以上，C1、C5、C6、C14、C15、C22、C26、B1、B3、A1、A2、A3对PC-9GR细胞抑制率在50％以上。此外我们发现这批化合物在10μM下，大部分化合物对PC-9细胞（EGFR L858R突变）的抑制率大于50％。
4.对于初筛抑制率较高的化合物C1和先导化合物YFQ07测定了相应的IC50值。C1对两株DDR1高表达的细胞IC50值分别为：PC-9GR细胞（DDR1高表达细胞）为1.59±0.36μM，A549为3.18±0.68μM。YFQ07对PC-9GR细胞（DDR1高表达细胞）为1.8±0.81μM，A549(DDR1高表达)为3.11±0.38μM。
5.化合物C1能够抑制肿瘤细胞集落的形成以及肿瘤细胞的迁移。
结论：
合成的45个化合物均对肺正常细胞毒性小，并且在10μM DDR1激酶初筛中，抑制率C1为92％，A1为68.3％，A2为53％，A3为91％，其中最好的化合物为C1，在10μM下对DDR1的抑制率为92％效果显著优于先导化合物YFQ07为26％。在细胞实验层面，C1对PC-9GR的IC50值为1.59±0.36μmol，它的效果优于YFQ07的IC50值1.8±0.81。此外发现我们设计合成的化合物对PC-9细胞（EGFR L858R突变）抑制率大部分超过了50％，并且C1能够抑制肺癌细胞集落的形成，以及能够抑制肿瘤细胞的迁移。