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目的:通过临床房颤病人的心肌样本,检测房颤心肌纤维化组织中程序性坏死的情况;提取小鼠原代心肌成纤维细胞（Cardiac Fibroblasts,CFs）,研究RIP1和RIP3调控CFs程序性坏死的机制;使用心肌纤维化小鼠模型,观察人参皂苷Rg1对心肌纤维化和心肌组织程序性坏死的治疗效果;最后探讨人参皂苷Rg1通过调控RIP1和RIP3对CFs程序性坏死的抑制作用。方法:1.房颤患者心肌组织中纤维化和程序性坏死检测:通过心肌组织HE、Masson和Sirius red染色检测临床病人心肌组织中纤维化情况;同时使用qRT-PCR、WB和免疫组化检测心肌组织中心肌纤维化相关蛋白COL1、α-SMA和程序性坏死相关蛋白RIP1、RIP3、MLKL、P-MLKL的水平。通过对比临床房颤病人（AF组）和窦性心律病人（SR组）,观察房颤心肌纤维化组织中程序性坏死的情况。2.RIP1和RIP3在CFs程序性坏死中的作用:提取小鼠原代CFs（Control组）,并利用程序性坏死诱导剂,来构建CFs程序性坏死模型（Model组）;再使用RIP1和RIP3的小干扰RNA沉默细胞中的RIP1和RIP3的表达（RIP1-siRNA组和RIP3-siRNA组）,通过流式检测CFs程序性坏死情况,使用qRT-PCR、WB、免疫荧光检测 COL1、α-SMA、RIP1、RIP3、MLKL、P-MLKL mRNA 和蛋白表达情况,并用ELISA法检测细胞上清液中IL-1β和IL-6的水平,初步探讨CFs程序性坏死中RIP1和RIP3的作用;通过RIP1和RIP3的过表达质粒,使CFs中的 RIP1 和 RIP3 过表达（RIP1-Vector 组和 RIP3-Vector 组）,利用 qRT-PCR 和WB检测COL1、α-SMA、RIP1、RIP3、MLKL、P-MLKL 的 mRNA 和蛋白表达情况,探究RIP1和RIP3对CFs程序性坏死的调控作用;在CFs细胞中过表达RIP1的同时沉默RIP3（RIP1-Vector+RIP3-siRNA组）,过表达RIP3的同时沉默RIP1（RIP3-Vector+RIP1-siRNA组）,继续检测上述指标,进一步探究RIP1和RIP3对CFs的程序性坏死具体调控机制。3.人参皂苷Rg1对ISO诱导的小鼠心肌纤维化模型中心肌组织程序性坏死的作用:采用异丙肾上腺素（Isoproterenol,ISO）构建小鼠心肌纤维化模型（Model组）,给予人参皂苷Rg1（Rg1组）干预,与对照组（Control组）比较心肌组织HE、Masson和Sirius red染色情况,评估心肌组织纤维化情况;检测血清炎症因子IL-1β和IL-6的水平;使用qRT-PCR、WB和免疫组化检测小鼠心肌组织中心肌纤维化相关蛋白COL1、α-SMA和程序性坏死相关蛋白RIP1、RIP3、MLKL、P-MLKL的mRNA和蛋白表达情况。通过与人参皂苷Rg1干预效果比较,明确Rg1对心肌纤维化的治疗作用和程序性坏死的抑制作用。4.人参皂苷Rg1对CFs程序性坏死中RIP1和RIP3的作用:提取小鼠原代细胞（Control组）,程序性坏死诱导剂诱导CFs程序性坏死（Model组）,并给予人参皂苷Rg1干预,通过流式检测CFs程序性坏死情况,使用qRT-PCR、WB、免疫荧光检测 COL1、α-SMA、RIP1、RIP3、MLKL、P-MLKL 的 mRNA 和蛋白表达情况,并用ELISA法检测细胞上清液中IL-1β和IL-6的水平,初步探讨人参皂苷Rg1对CFs程序性坏死的抑制作用;过表达CFs细胞中的RIP1和RIP3（RIP1-Vector组和RIP3-Vector组）,随后分别给予两组细胞人参皂苷Rg1干预（RIP1-Vector+Rg1 组和RIP1-Vector+Rg1 组）,利用 qRT-PCR和 WB检测 COL1、α-SMA、RIP1、RIP3、MLKL、P-MLKL mRNA 和蛋白表达情况,明确 Rg1 对CFs程序性坏死中RIP1和RIP3的调控作用。结果:1.房颤患者心肌组织中纤维化和程序性坏死检测:与SR组相比,AF组中HE、Masson和Sirius red染色的病理指标均明显升高（P＜0.05）;COL1、α-SMA、RIP1、RIP3、MLKL、P-MLKL 的 mRNA 明显升高（P＜0.05）,COL1、α-SMA、RIP1、RIP3、MLKL、P-MLKL的蛋白表达在WB和免疫组化结果中均明显升高（P＜0.05）。2.RIP1和RIP3在CFs程序性坏死中的作用:与Control组相比,Model组细胞程序性坏死率升高（P＜0.05）,细胞中COL1、α-SMA、RIP1、RIP3、MLKL、P-MLKL的mRNA和蛋白水平均显著升高（P＜0.05）,免疫荧光显示出同样趋势（P＜0.05）,细胞上清IL-1β和IL-6的水平明显升高（P＜0.05）;与Model组相比,RIP1-siRNA组中程序性坏死率无明显变化,RIP1的mRNA和蛋白水平均显著降低（P＜0.05）,免疫荧光显示出同样的趋势（P＜0.05）,COL1、α-SMA、RIP3、MLKL、P-MLKL的mRNA和蛋白水平无明显变化（P＞0.05）,细胞上清IL-1β和IL-6的水平也无明显变化（P＞0.05）;与Model组相比,RIP3-siRNA组中细胞COL1、α-SMA、RIP3、MLKL、P-MLKL的mRNA和蛋白水平均显著降低（P＜0.05）,免疫组化显示出同样趋势（P＜0.05）,但RIP1的上述结果无明显变化（P＞0.05）,细胞上清IL-1β和IL-6的水平也明显降低（P＜0.05）;与Control 组相比,RIP1-Vector 组中,细胞 COL1、α-SMA、RIP3、MLKL、P-MLKL的mRNA和蛋白水平均显著升高（P＜0.05）,与Control组相比,RIP3-Vector组的细胞COL1、α-SMA、RIP3、MLKL、P-MLKL的mRNA和蛋白水平均显著升高（P＜0.05）,RIP1的上述结果无明显变化（P＞0.05）;Control组相比,RIP1-Vector+RIP3-siRNA组中RIP1的mRNA和蛋白水平均显著升高（P＜0.05）,COL1、α-SMA、RIP3、MLKL、P-MLKL 的 mRNA 和蛋白水平无明显变化（P＞0.05）;Control 组相比,RIP3-Vector+RIP1-siRNA 组中 COL1、α-SMA、RIP3、MLKL、P-MLKL的mRNA和蛋白水平均显著升高（P＜0.05）,RIP1的上述结果无明显变化（P＞0.05）。3.人参皂苷Rg1对ISO诱导的小鼠心肌纤维化模型中心肌组织程序性坏死的作用:与Control组相比,Model组小鼠血清IL-1β和IL-6的水平明显升高（P＜0.05）,心肌组织中 COL1、α-SMA、RIP1、RIP3、MLKL、P-MLKL 的 mRNA和蛋白水平均显著升高（P＜0.05）,免疫组化中上述指标也明显升高（P＜0.05）;与Model组相比,Rg1组小鼠血清IL-1β和IL-6的水平明显降低（P＜0.05）,心肌组织中 COL1、α-SMA、RIP1、RIP3、MLKL、P-MLKL 的 mRNA 和蛋白水平均显著降低（P＜0.05）,免疫组化上述指标也明显降低（P＜0.05）。4.人参皂苷Rg1对CFs程序性坏死中RIP1和RIP3的作用:与Control组相比,Model组细胞程序性坏死率升高（P＜0.05）,细胞中COL1、α-SMA、RIP1、RIP3、MLKL、P-MLKL的mRNA和蛋白水平均显著升高（P＜0.05）,免疫荧光显示出同样趋势（P＜0.05）,细胞上清IL-1β和IL-6的水平明显升高（P＜0.05）;与Model组相比,Rg1组细胞程序性坏死率降低（P＜0.05）,细胞中COL1、α-SMA、RIP 1、RIP3、MLKL、P-MLKL 的 mRNA 和蛋白水平均显著降低（P＜0.05）,免疫荧光显示出同样趋势（P＜0.05）,细胞上清IL-1β和IL-6的水平明显升高（P＜0.05）;Control 组相比,RIP1-Vector 组中与 Control 组相比,RIP1-Vector 组中,细胞COL1、α-SMA、RIP3、MLKL、P-MLKL的mRNA和蛋白水平均显著升高（P＜0.05）,与 Control 组相比,RIP3-Vector 组的细胞 COL1、α-SMA、RIP3、MLKL、P-MLKL的mRNA和蛋白水平均显著升高（P＜0.05）,RIP1的上述结果无明显变化（P＞0.05）;与 RIP1-Vector 相比,RIP1-Vector+Rg1 组中 COL1、α-SMA、RIP1、RIP3、MLKL、P-MLKL 的mRNA和蛋白水平均显著降低（P＜0.05）;与 RIP3-Vector 相比,RIP3-Vector+Rg1 组中 COL1、α-SMA、RIP3、MLKL、P-MLKL的mRNA和蛋白水平均显著降低（P＜0.05）,RIP1的上述结果无明显变化（P＞0.05）。结论:1.心肌成纤维细胞的程序性坏死会导致房颤心肌纤维化。2.RIP3可以不依赖RIP1,独立诱导心肌成纤维细胞的程序性坏死,但RIP1诱导心肌成纤维细胞的程序性坏死则需要RIP3作为下游。3.人参皂苷Rg1可以减轻ISO诱导的心肌纤维化,并减轻纤维化过程中心肌组织的程序性坏死。4.人参皂苷Rg1可以通过抑制RIP1和RIP3的表达,减轻心肌成纤维细胞的程序性坏死,并进一步减轻心肌纤维化。