马立克氏病是由马立克氏病病毒引起的一种T淋巴细胞增生的恶性传染性肿瘤疾病,对家禽产业造成了巨大的经济损失。通过使用疫苗该病得到了有效的防控,但仍然不能阻止MDV的传播。MDV能够引起家禽的免疫抑制和致死性淋巴瘤,导致其他病毒和细菌的继发感染,甚至死亡。MDV在体内建立感染的同时,首先会突破天然免疫。cGAS-STING信号通路能够感知dsDNA病毒,从而诱导IFN-β的产生,目前关于疱疹病毒逃逸cGAS-STING信号通路的研究已有大量报道,而关于家禽疱疹病毒的天然免疫逃逸机制研究较少。本研究主要关注cGAS-STING信号通路与MDV复制关系,并深入研究病毒编码蛋白对cGAS-STING信号通路的影响,为进一步解释MDV的免疫抑制机制提供理论依据。1.激活cGAS-STING信号通路抑制MDV在CEF细胞中的复制为研究家禽细胞中是否含有完整的cGAS-STING信号通路,本研究利用哺乳动物STING激活剂2’-3’cGAMP作用于鸡胚成纤维细胞(CEF),通过荧光定量PCR检测到CEF细胞中IFN-β mRNA上调,提示CEF细胞中存在cGAS-STING通路;同时2’-3’cGAMP可以抑制MDV在CEF中的复制,表明cGAS-STING信号通路的激活能够降低MDV在CEF中的复制;MDV感染CEF细胞发现STING、IRF7以及IFN-β mRNA均有所上调,提示MDV能够激活CEF细胞中cGAS-STING信号通路,并促进IFN-β产生。2.cGAS、STING基因克隆表达及生物学功能初步研究为进一步探索cGAS-STING信号通路在家禽细胞中的作用,本研究PCR克隆了鸡源chcGAS和chSTING基因,与哺乳动物cGAS、STING进行同源性比对和进化树分析。比对结果发现鸡源chcGAS、chSTING和其它禽类同源性在70%～90%左右,和哺乳动物cGAS、STING同源性在40%左右。将chcGAS、chSTING基因真核表达载体转染细胞,双荧光素酶报告实验结果显示chcGAS和chSTING均能够上调IFN-β和IRF7的启动子活性。荧光定量PCR结果显示chcGAS、chSTING能够上调TBK1、IRF7和IFN-β mRNA的表达水平。这些结果说明chcGAS和chSTING在家禽细胞中同样发挥激活IFN-β表达的作用。同时CEF细胞中过表达STING能够激活cGAS-STING信号通路并抑制MDV的复制。3.MDV编码蛋白对cGAS-STING信号通路的影响MDV的Meq蛋白对于肿瘤的产生和转化及抗细胞凋亡具有重要的作用。MDV在体内建立感染,首先需要突破天然免疫,逃逸宿主的抗病毒反应。本研究克隆三株MDV(RB-1B,AH1410,CVI988)的 meq基因,与 cGAS、STING 共同转染 CEF,发现均能抑制由cGAS、STING引起的IFN-β启动子活性的升高,并且这种抑制作用呈现剂量依赖性,这表明Meq对于天然免疫具有一定的抑制作用。进一步将Meq分段表达并与cGAS、STING共转染DF-1细胞,结果表明Meq发挥抑制IFN-β的最短氨基酸序列位于271～281aa。这一结果进一步验证了 Meq的免疫抑制作用,并为MDV新型疫苗的研发提供新的靶点。